经脾脏移植BMP-4诱导分化的肝干细胞治疗大鼠急性肝衰竭的实验研究

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目的:经脾脏移植BMP-4诱导分化的肝干细胞,探讨其对四氯化碳所致的SD大鼠急性肝功能衰竭的治疗作用。方法:建立SD大鼠肝干细胞增殖模型,分离、培养和扩增大鼠肝干细胞,即肝卵圆细胞(hepatic oval cell, HOC);构建携带GFP的大鼠BMP-4腺病毒载体,并转染原代大鼠肝干细胞。以免疫荧光染色检测不同细胞分子标记物的表达,鉴定原代HOC和BMP-4诱导分化后的细胞表型。以腹腔注射四氯化碳建立大鼠急性肝衰竭模型,造模后24h将4×107/ml细胞悬液经大鼠脾脏异体移植。细胞移植术后记录SD大鼠生存率,分别于术后第2d、5d和7d,尾静脉取血送肝功能检测,获取大鼠肝组织标本行HE染色及免疫荧光检测。结果:分离所得的大鼠原代HOC表达OV6,不表达Alb和CK19;腺病毒转染HOC 24h后,表达荧光蛋白GFP,转染Ad-BMP-4后18d的HOC表达肝细胞标志Alb;实验组大鼠的生存率、肝功能及肝脏损伤修复明显优于对照组(p<0.05)。组织免疫荧光染色结果显示,实验组GFP阳性细胞较对照组细胞的增殖明显。结论:BMP-4可体外诱导大鼠原代HOC向肝细胞定向分化;经脾脏异体移植以BMP4诱导分化的HOC,可明显改善CCl4所致SD大鼠急性肝衰竭。
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