陕西部分地区豆科植物共生固氮资源调查及神木地区根瘤菌多样性研究

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本文对陕西省关中、陕北地区豆科植物根瘤菌资源进行一次比较全面调查和收集,并对分离自神木地区的56株根瘤菌分别采用数值分类、16S rDNA PCR-RFLP、23S rDNA PCR-RFLP、16S rDNA测序多种方法进行分群及系统发育方面的研究。主要结论如下:1.通过对陕西关中、陕北27个县市不同生态环境下豆科植物共生固氮资源调查,共采集到根瘤930份,其寄主包括28个属,59个种,分离后得到710株根瘤菌。在这次调查中,在这一地区我们新发现10种结瘤豆科植物,分别为:铁扫帚(Indigofera bungeana Walp)、地八角(Astragalus bhotanensis Baker)、乳白黄芪(Astragalus galactites Pall)、小叶野决明(Thermopsis chinensis Bench)、宽苞棘豆(Oxytropis latibracteata Turtz)、黄毛棘豆(Oxytropis ochrantha Turcz)、硬毛棘豆(Oxytropis hirta Bunge)、塔落岩黄耆(Hedysarum fruticosum Pall)、葛藤(Pueraria Lobata Ohwi)、毛掌锦鸡儿(Caragana leveillei Kom)。在对豆科植物的结瘤特性比较研究后发现,豆科植物根瘤大小、数量、形状、颜色、着生部位除与寄主植物种有关系外,还与其所处的生态环境有很大的关系。该调查为根瘤菌在农业生产及生态环境建设中的应用提供宝贵的种质资源。2.对分离自神木地区56株供试菌株进行唯一碳氮源利用、抗生素敏感性测定、耐盐碱、耐重金属等153项指标测定。数值聚类结果表明,神木地区根瘤菌在85%的相似水平上主要分为3个表观群,分布于Rhizobium和Mesorhizobium 2个系统发育支上。群Ⅰ与M. huakuii关系较近,但没有聚在一起,初步认为是Mesorhizobium一个新表观群,群Ⅱ与R. loessense聚在一起,群Ⅲ与M. temperatum聚在一起。性状测试结果表明,神木地区部分菌株在抗生素抗性、耐盐碱、耐重金属能力等方面表现较强的抗逆性。3.对56株供试菌株分别采用16S rDNA PCR-RFLP和23S rDNA PCR-RFLP分析。结果表明,除有部分差异外,16S rDNA PCR-RFLP、23S rDNA PCR-RFLP和数值分类三者聚类结果基本一致。将16S rDNA PCR-RFLP和23S rDNA PCR-RFLP数据叠加后进行综合分析,能更好揭示菌株间系统发育关系。4.对数值分类表观Ⅰ的中心菌株SM84-1用16S rDNA测序方法进行系统发育学研究。结果表明,在所有参比菌株中,SM84-1与M. amorphae相似性最高,相似性为99.7%。这一结果进一步验证聚类分析结果。
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