研究背景生殖道沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,CT）感染是世界上最常见的性传播疾病,大部分患者为无症状感染,未及时诊治可导致严重的并发症,如宫颈炎、不孕、不育、异位妊娠、输卵管堵塞和早产等,严重威胁人类生殖健康。目前治疗沙眼衣原体感染的药物主要为大环内酯类、四环素类等抗生素,但近年来临床治疗失败的报道日益增多,因此,寻找新方法或新药物治疗CT感染已成为临床上亟需解决的重要问题。本课题组前期研究发现黄连素具有体外抗CT活性,但黄连素抑制沙眼衣原体生长的作用机制尚未见国内外文献报道。本研究通过细胞感染模型和动物感染模型探讨黄连素对沙眼衣原体的抑制作用,并结合转录组学分析,初步探讨黄连素抑制沙眼衣原体感染的作用机制。研究目的1.从细胞水平明确黄连素抑制沙眼衣原体感染的作用。2.从小鼠感染模型探讨体内黄连素抑制沙眼衣原体感染的作用。3.结合转录组学初步探讨黄连素抑制沙眼衣原体感染的作用机制。研究方法1.通过CCK-8实验确定黄连素在细胞水平的药物作用浓度;应用免疫荧光染色、感染性子代效价、Western blotting及透射电镜技术研究黄连素在不同血清型沙眼衣原体（D、E、F、L1）和不同细胞系（Hela、Vero、Mc Coy）中对沙眼衣原体感染的作用。2.建立小鼠衣原体阴道感染模型,探究黄连素在体内抑制沙眼衣原体感染的作用。3.通过RNA-seq技术分析阳性对照组与黄连素处理组的基因表达情况,对差异表达的基因进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,通过RT-q PCR和Western blotting检测相关基因的转录和表达水平,初步探究黄连素抑制沙眼衣原体感染的作用机制。研究结果1.在细胞水平中,不同血清型沙眼衣原体（D、E、F、L1）感染Hela细胞或D型沙眼衣原体感染不同类型细胞（Hela、Vero、Mc Coy）,经黄连素处理后沙眼衣原体感染率,包涵体面积及子代效价均显著降低（P＜0.05）;黄连素抑制沙眼衣原体感染具有剂量效应和时间效应;此外,黄连素与阿奇霉素联合使用具有相加作用。2.在小鼠感染模型中,小鼠阴道拭子的衣原体培养滴度显示,黄连素处理组和黄连素、阿奇霉素联合处理组分别作用3天、7天,与用药前比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;阿奇霉素处理组作用3天与用药前比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。3.沙眼衣原体感染阳性对照组和黄连素处理组的RNA-seq结果显示共有2969个基因表达有差异。GO功能分析差异基因主要富集在氧化应激、外源性凋亡信号调控、细胞粘附因子结合通路;KEGG通路分析发现细胞周期、凋亡、NF-k B信号通路、碳代谢等通路显著富集。4.Western blotting结果显示黄连素处理组细胞外信号调节激酶（Extracellular regulated protein kinases,ERK）磷酸化蛋白表达下调,促红细胞生成素产生肝细胞受体A2（Erythropoietin-producing hepatocellular receptor A2 Erythropoietinproducing,Eph A2）蛋白和磷酸化蛋白表达下调。研究结论1.细胞感染模型中黄连素对沙眼衣原体存在显著的抑制作用,且在不同血清型沙眼衣原体和不同细胞系中均存在,同时具有剂量效应和时间效应。此外,黄连素与阿奇霉素联合使用具有相加作用。2.小鼠模型中黄连素对阴道衣原体感染具有抑制作用,此外与阿奇霉素联合使用效果更好。3.黄连素抑制沙眼衣原体的机制可能与抑制ERK和Eph A2的磷酸化有关。