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背景与目的口腔黏膜下纤维性变(oral submucous fibrosis, OSF)是发生于口腔黏膜的一种慢性、隐匿性疾病,其发病与咀嚼槟榔习惯关系密切,已经被世界卫生组织定义为癌前状态。与其他纤维化疾病一样,OSF目前尚无特效的治疗方法。同时合适动物模型的缺乏已经制约了对其具体病因、发病机制及治疗方法的进一步研究。姜黄素是中药姜黄的主要活性成分,已有报道称其具有较好的抗纤维化的作用。本研究拟通过局部注射博来霉素(Bleomycin, BLM)制备出重复性较好的OSF动物模型,然后在此基础上结合体外实验探讨姜黄素用于治疗OSF的可行性及作用机理。方法首先,进行动物模型的制备。SD大鼠100只,随机分为正常组、对照组和实验组。实验组大鼠在异氟烷的麻醉状态下,于双侧颊黏膜下注射BLM稀释液,每天一次,共持续八周。对照组采用磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffered Saline, PBS)代替BLM稀释液。正常组不给任何干预。在规定时间处死大鼠后,采用HE染色、masson染色、羟脯氨酸碱水解法、免疫组化、western blotting及透射电镜分别检测各组大鼠颊黏膜组织病理、胶原水平、肌成纤维细胞(myofibroblast, MFB)、TGF-β1、IFN-γ及超微结构的变化情况。然后,SD大鼠35只,随机分为正常组、对照组、低剂量姜黄素组和高剂量姜黄素组。正常组大鼠不给予任何干预。其余大鼠在颊黏膜局部注射BLM4周后,采用不同剂量的姜黄素模型大鼠进行灌胃4周。大鼠处死后,采用HE染色、免疫组化和western blotting观察其颊黏膜组织病理、MFB、胶原水平、TGF-β1、 IFN-y和IL-13的表达水平。最后,采用体外细胞原代培养的方法,培养人正常颊黏膜成纤维细胞(fibroblast, FB),并利用TGF-β1将其诱导成为MFB表型。不同浓度姜黄素干预后,利用MTT、流式细胞术、western blotting及ELISA分别观察细胞增殖、细胞周期、凋亡、相关凋亡蛋白及上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变。结果1、SD大鼠颊黏膜局部注射1mg/ml的BLM8周可以诱导出临床和病理上与人OSF相似的改变；2、较高剂量姜黄素可以降低BLM局部注射4周(病理改变接近人OSF早、中期)的SD大鼠颊黏膜组织中TGF-β1和IL-13的表达,提高IFN-y的表达,减少MFB；但对Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变不明显；3、2.5-40μM的姜黄素可以抑制体外培养的FB和MFB增殖,且对MFB的抑制作用更加明显,并且将MFB阻滞在G0/G1期。10-40μM的姜黄素可以诱导MFB凋亡,提高Bax蛋白的表达,降低Bcl-2蛋白的表达,降低其上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达水平。结论1、SD大鼠颊黏膜局部注射1mg/ml的BLM8周可以制备出类似人OSF病变的实验性OSF大鼠模型；该模型制作快捷,重复性好,但仍然存在一定的局限性。2、姜黄素可以改善lmg/ml BLM颊黏膜局部注射4周的(病理改变接近人OSF早、中期)SD大鼠的张口度,降低主要致纤维化细胞因子TGF-β1的表达,阻止纤维化的进一步发展；3、在体外姜黄素可以通过抑制MFB增殖,促进其凋亡,减少Ⅰ、Ⅲ型胶原生成,发挥抗纤维化作用。