蹄叶橐吾化学成分与抗氧化作用研究

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蹄叶橐吾Ligularia fischeri (Ledeb) Turcz为菊科橐吾属多年生草本植物,使用历史悠久,在我国各地区均有广泛应用,极具开发价值。本课题以采自吉林省延边朝鲜自治州图们市的蹄叶橐吾全草为研究对象,对其化学成分及抗氧化作用进行了系统研究。对蹄叶橐吾甲醇提取物及石油醚、二氯甲烷、正丁醇和水等不同溶剂萃取物,通过二苯代苦味肼基自由基[1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)]清除实验方法,评价它们的抗氧化作用。结果蹄叶橐吾的甲醇提取物和正丁醇萃取物具有较强的抗DPPH自由基活性,其半数有效值IC50分别为13.24和3.70μg/mL。以氯仿为溶剂超声提取蹄叶橐吾的脂溶性成分,利用气相色谱-质谱联用仪对提得物质进行分离和鉴定,采用色谱峰面积归一化法确定脂溶性各组成成分的相对含量。结果共分离出33个峰,鉴定了其中19个成分,占脂溶性总成分的71.58%。采用硅胶柱层析、Sephadex LH-20及半制备高效液相色谱仪等方法从蹄叶橐吾中分离得到6个化合物,并运用光谱分析技术ESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR等进行了结构鉴定,分别为:金丝桃苷(1)、2″-乙酰金丝桃苷(2)、3-羰基-8α-甲氧基-10αH-1,7(11)-二烯-12,8β-内酯-艾里莫酚倍半萜(3)、橐吾醛(4)、β-谷甾醇(5)胡萝卜苷(6)。其中化合物1、2为从该属植物中首次分离,化合物3为从该植物中首次分得的化合物。在系统研究化学成分的基础上,建立了蹄叶橐吾中金丝桃苷和2″-乙酰金丝桃苷的高效液相色谱含量测定方法。对金丝桃苷和2″-乙酰金丝桃苷进行同步含量测定,以乙腈-水(23:77)为流动相,检测波长为354 nm,采用峰面积外标法计算含量。结果金丝桃苷平均含量(n=6)为0.387 mg/g, RSD为0.52%:2″-乙酰金丝桃苷平均含量(n=6)为0.526 mg/g, RSD为1.29%。活性研究方面,采用总抗氧化能力测定、羟自由基测定、DPPH自由基清除实验等体外抗氧化活性评价方法,对蹄叶橐吾的甲醇总提物、各萃取部位以及分离纯化出的单体化合物进行测定。三种方法结果一致,均显示蹄叶橐吾甲醇总提物、正丁醇和水萃取物,金丝桃苷和2″-乙酰金丝桃苷具有较好的抗氧化能力。综上,利用不同的分离方法从蹄叶橐吾中分离、鉴定了极性不同的各成分,建立了蹄叶橐吾中金丝桃苷和2″-乙酰金丝桃苷的高效液相色谱含量测定方法,并评价了蹄叶橐吾的甲醇总提物、各萃取部位以及分离纯化出的单体化合物的体外抗氧化活性,为今后的进一步研究提供了实验依据,并有助于促进民族地区常用药用植物资源的开发利用。
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