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目的：探讨利用RNA干扰(RANi)技术等改变survivin基因的表达,对雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞放射敏感性的影响,并初步阐述相关机制。
方法：通过脂质体介导,将含survivin基因小分子干扰RNA的重组真核表达质粒pSilencer-surRNAi、survivin基因过表达质粒pcDNA3.1-survivin、空载质粒pcDNA3.1-control转染PC-3细胞,分别获得PC-3-RNAi细胞、PC-3-WT细胞、PC-3-control细胞,同时设未转染的PC-3细胞为阴性对照。对四个实验组用RT-PCR技术、蛋白印迹法分别检测survivin mRNA和蛋白的表达水平差异；用0,1,2,4,6,8,10Gy剂量照射后,利用平板克隆形成实验以简单多靶单击数学模型绘制出放射生物学细胞存活曲线,并求出Do、Dq、N、SF2、SER值；“彗星”分析法检测DNA损伤和修复；Hoechst染色法观察细胞凋亡。
结果：与PC-3-control、PC-3细胞相比PC-3-RNAi细胞survivin mRNA和蛋白的表达水平明显下降,PC-3-WT细胞survivin mRNA和蛋白的表达水平明显上升,PC-3-control、PC-3细胞之间无明显差异。绘制放射生物学细胞存活曲线,求出四组Do、Dq、N、SF2值分别为1.8278、1.5046、2.4633、0.6337(PC-3-WT细胞组),1.5084、0.9733、1.7546、0.4182(PC-3-control细胞组),1.3743、0.9733、1.9259、0.4005(PC-3细胞组),1.2824、0.4294、1.1980、0.2463(PC-3-RNAi细胞组),PC-3-RNAi组SER=1.7。“彗星”分析法结果PC-3-WT、PC-3-control、PC-3、PC-3-RNAi四个细胞组的TM(尾力矩)分别为310.16、120.22、114.89、75.371。PC-3-control细胞和pc-3细胞之间尾力矩无明显差异(P>0.05);PC-3-RNAi细胞与另三组比较有明显差异(P<0.05);PC-3-WT细胞与另三组比较亦有明显差异(P<0.05)。Hoechst染色法观察与PC-3-control细胞、PC-3细胞相比PC-3-RNAi细胞凋亡数量明显上升,PC-3-WT细胞凋亡数量明显明显下降,PC-3-control细胞、PC-3细胞之间凋亡数量无明显差异。
结论:Survivin基因的表达水平与PC-3细胞的放射敏感性呈负相关,其影响机制可能是诱导细胞凋亡和减弱细胞的亚致死性损伤修复两方面。通过RNA干扰技术可降低survivin基因在雄激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞中的表达水平起到放射增敏的作用。