目的：盆腔自主神经(pelvic autonomic nerve)司性功能支配，直肠癌手术盆腔自主神经损伤导致的术后性功能障碍，一直以来都是影响患者术后生活质量的焦点问题。传统的直肠癌扩大淋巴清扫术后病人性功能障碍发生率为15％～100％，虽然目前开展了TME基础上的盆腔自主神经保护(pelvic autonomic nerve preservation，PANP)术式，患者术后性功能障碍的发生率呈明显下降，但PANP术后勃起功能障碍的发生率仍在32.7％，射精功能障碍的发生率更高达44.2％。PANP并非适用所有直肠癌患者，为追求PANP而未达到根治性切除标准所导致的术后局部复发风险增加是不可接受的。此外，盆腔空间狭小操作困难，术者对盆腔自主神经未予足够的保护，都是造成直肠癌手术盆腔自主神经损伤术后发生性功能障碍的重要原因。 为避免盆腔自主神经损伤，我们强调遵循PANP术式要求、注重手术技巧从而尽量减少自主神经损伤，而一但损伤术后发生性功能障碍，人们则爱莫能助。盆腔自主神经的修复再造是唯一可能的解决方法，目前尚未见此类研究报道。本研究旨在尝试盆腔自主神经的修复再造，以比格犬盆腔自主神经损伤模型为研究对象，利用骨髓间充质干细胞与自体腹膜桥接体联合移植修复缺损的盆腔自主神经，以期为此类损伤探索一种可行的治疗方法。 方法：健康成年雄性比格犬9只，穿刺抽取其中1只髂骨骨髓10ml，送实验室行BMSCs分离和原代培养，传代扩增至实验需要量，备用。取比格犬9只盆腔两侧腹下神经共18条制作盆腔自主神经损伤模型，分为3组各6条神经，均切取神经中段10mm为损伤模型。实验组(骨髓间充质干细胞移植组)取自体腹膜制作内径1.5mm、长14mm的腹膜管，管内填充胶原蛋白海绵+骨髓间充质干细胞悬液桥接于缺损神经两端，对照组(空白组)同样方法制作损伤模型和自体腹膜管，管内填充胶原蛋白海绵+生理盐水桥接于缺损神经两端，正常对照组(自体神经移植组)将切取的10mm神经中段倒转180°桥接于缺损神经两端。12周后处死动物，切取桥接体为标本，石蜡包埋切片。应用HE染色和NF免疫组织化学染色方法观察神经纤维再生情况，应用图像分析方法进行再生神经纤维总数、密度、直径和面积百分比测量；70nm超薄切片透射电镜观察再生神经纤维的超微结构。 结果： 一、桥接腹膜管再生神经大体形态改变 大体观察术前见腹下神经直径约1mm，灰白色略带光泽，位于后腹膜外紧贴腹膜。术后见桥接腹膜管被结缔纤维组织包绕，与周围组织轻度粘连，解剖分离无困难。桥接腹膜管内可见再生神经生长，直径1.5mm，腹膜管无塌陷变形，外观保持好，桥接腹膜管两端的神经无变性萎缩。实验组桥接腹膜管内再生神经横切面呈灰白色，对照组桥接腹膜管内再生神经横切面亦呈灰白色，色较实验组稍浅，自体神经移植组倒转移植段与周围组织轻度粘连，生长良好，无变性萎缩，各组均无神经瘤形成。 二、桥接腹膜管再生神经组织学改变 1、HE染色 光镜下实验组桥接腹膜管横切面可见管内大量再生无髓神经纤维生长，分布较均匀，排列较规则，再生神经纤维多呈束状生长，其间可见毛细血管。对照组桥接腹膜管横切面亦可见管内再生神经纤维生长，较实验组稀疏，排列较不规则，自体神经移植组桥接横切面可见再生神经纤维呈束状生长，分布均匀，排列规则。各组移植段纵切面再生神经纤维均呈波浪状走行，其间可见许多椭圆形、染色较深的施旺细胞核。 2、免疫组织化学染色 光镜下NF免疫组织化学染色再生神经纤维均被染成棕黄色，横切面神经纤维染色呈颗粒点状，呈束状生长，其间可见毛细血管，纵切面神经纤维染色呈波浪状，其间可见呈列兵状排列、蓝染的施旺细胞核。实验组与对照组再生神经纤维总数比较有统计学意义(1742±185vs1131±262，P<0.01)，与自体神经移植组比较无统计学意义(1742±185vs1884±143，P>0.05)。实验组再生神经纤维较密集，排列较规则，对照组神经纤维明显稀疏，排列不规则，实验组与对照组神经纤维密度比较有统计学意义(168±14 vs 124±17，P<0.01)，自体神经移植组再生神经纤维密集，排列规则，实验组与之比较无统计学意义(168±14 vs180±12，P>0.05)。实验组再生神经纤维直径较均等，对照组神经纤维粗细不等，实验组与对照组比较有统计学意义(3.83±0.22 vs 3.28±0.41，P<0.05)，自体神经移植组神经纤维亦较均等，实验组与之比较无统计学意义(3.83±0.22 vs4.02±0.27，P>0.05)。各组再生神经纤维面积百分比的比较还显示，实验组与对照组比较有统计学意义(0.32±0.07 vs 0.21±0.08，P<0.05)，实验组与自体神经移植组比较无统计学意义(0.32±0.07 vs 0.38±0.05，P>0.05)。结果显示，实验组再生神经纤维的生长明显优于对照组，而与自体神经移植组相当。 3、透射电镜 再生神经纤维形态接近正常，可见大量无髓神经纤维，施旺细胞包绕再生神经纤维轴突，结构清晰。 结论： 1、骨髓间充质干细胞与自体腹膜桥接体联合移植组修复盆腔自主神经缺损再生神经纤维总数、密度、直径、面积百分比和神经结构均明显优于无骨髓间充质干细胞组，与自体神经移植的效果相当。 2、骨髓间充质干细胞与自体腹膜桥接体联合移植修复盆腔自主神经损伤再生神经生长好，效果确切，方法可行。