论文部分内容阅读
第一部分屋尘蟎刺激的人支气管上皮细胞表达炎症介质的改变目的通过测定人支气管上皮细胞在被屋尘螨和地塞米松刺激前后,IL-29、IL-6及NF-κB的表达情况,及相互关联,进一步探讨三者与屋尘螨引起的气道炎症的关系。方法将人支气管上皮细胞分为A组（空白对照组）、B组（300ng/mL屋尘螨）、C组（100ng/mL屋尘螨）、D组（3000ng/mL屋尘螨）、E组（300ng/mL屋尘螨 +100 ng/mL地塞米松）,检测各组细胞IL-29、IL-6及NF-κB/p65的mRNA相对表达量及上清液中IL-29及IL-6的蛋白含量。结果屋尘螨刺激24小时后,B组、C组、D组的IL-29、IL-6蛋白及mRNA、NF-κB/p65mRNA表达明显的高于A组,并且,E组经屋尘螨和地塞米松共刺激24小时后,IL-29、IL-6蛋白及mRNA、NF-κB/p65mRNA表达明显低于那些仅被屋尘螨刺激的组别,但高于空白对照组,各组间差异有统计学意义（F值分别为191.983;415.311;65.377;283.037;294.367;P值均<0.01）,且屋尘螨浓度越高,IL-29、IL-6蛋白及mRNA、NF-κB/p65mRNA表达水平增高越明显。且各组IL-29 mRNA、IL-6mRNA均与NF-κB/p65mRNA水平呈现正相关（r=0.899,P=0.000;r=0.883,P=0.000）。结论屋尘螨可能通过激活NF-κB炎症信号通路,进而引起IL-6、IL-29的表达增加,参与屋尘螨引起的气道炎症的发生发展过程。第二部分屋尘螨诱导人支气管上皮细胞表达炎症介质的机制目的通过测定NF-κB/p65 siRNA对屋尘螨刺激的人支气管上皮细胞的NF-κB及IL-6、IL-29的表达水平的影响,探讨屋尘螨致气道炎症的发生机制。方法将人支气管上皮细胞分为A组（空白对照组）、B组（300ng/mL屋尘蟥）、C组（300ng/mL屋尘螨+NFκB-siRNA）、D组（300ng/mL屋尘螨+siRNA阴性对照）。检测各组细胞IL-6、IL-29、NF-κB/p65mRNA、NF-κB/p65核蛋白的相对表达量及细胞上清液中IL-29及IL-6的蛋白含量。结果C组经NF-κB/p65 SiRNA转染及屋尘螨作用24小时后,NF-κB/p65mRNA、NF--κB/p65核蛋白、IL-6mRNA、IL-29mRNA及细胞上清液中IL-6及IL-29的蛋白含量仍然高于A组,但低于B组及D组,各组间差异有统计学意义（F值分别为193.456;228.565;135.168;55.725;162.279;108.313;P值均<0.01）。结论NF-κB/p65 siRNA有效的抑制人支气管上皮细胞NF-κB/p65的表达后,炎症因子IL-6、IL-29表达亦减少。实验进一步证明NF-κB信号通路是屋尘螨诱导气道上皮细胞产生炎症因子IL-6、IL-29的通路之一。第三部分醛糖还原酶抑制剂对屋尘螨诱导的气道炎症及炎症介质的调控目的测定醛糖还原酶抑制剂对屋尘蟥诱导的人支气管上皮细胞及小鼠气道的NF-κB及细胞因子的表达水平的影响,并观察其对小鼠气道炎症的影响,探索气道炎症新的干预措施。方法细胞实验:将人支气管上皮细胞分为A组（空白对照）、B组（屋尘螨）、C组（屋尘螨+醛糖还原酶抑制剂Zopo）,检测各组细胞NF-κB/p65mRNA的相对表达量、NF-κB/p65核蛋白、上清液中IL-29及IL-6的蛋白含量。动物实验:小鼠随机分为3组:A组（对照组）,B组（屋尘螨组）和C组（Zopo组）,采用屋尘螨变应原制剂致敏和激发建立小鼠气道炎症模型。用小鼠肺功能仪无创肺阻抗法检测小鼠的气道反应性变化,苏木素伊红（HE）染色方法观察小鼠气道及肺组织炎症浸润情况,细胞计数板对小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中各细胞分类及计数,检测各组小鼠BALF中IL-6、IL-8,IL-29,TNF-α的表达;测定小鼠肺组织NF-kB/p65 IL-6、IL-8、IL-29、TNF-α的mRNA相对表达水平;检测小鼠肺组织中NF-kB/p65核蛋白的表达强度。结果细胞实验显示:C组经屋尘螨及醛糖还原酶抑制剂共同作用24小时后,人支气管上皮细胞的NF-κB/p65mRNA水平、NF-κB/p65核蛋白水平、IL-6蛋白水平、IL-29蛋白水平均明显的低于B组（F值分别为159.909;233.350;167.999;127.196;P值均<0.01）。动物实验显示:病理检查示Zopo组经醛糖还原酶抑制剂干预后,炎症细胞浸润较屋尘螨组明显减轻,支气管肺泡灌洗液中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比均较屋尘螨组降低（F值分别为100.179;698.70;157.260;P值均<0.05）,且当乙酰甲胆碱浓度增加至25mg/ml、50mg/ml时,Zopo组小鼠的气道反应性较屋尘螨组明显降低,差异有统计学意义（F值分别为51.899;60.486;P值均<0.05）,进一步分析发现,Zopo组小鼠肺组织的NF-kB/p65mRNA、NF-κB/p65核蛋白水平均明显的低于屋尘螨组（F值分别为124.176;188.517;P值均<0.05）,且IL-6、IL-8、IL-29、TNF-α的mRNA相对表达水平及蛋白水平均明显的低于屋尘螨组（F 值分别为75.162;172.151;59.133;68.042;92.659;133.655;102.864;79.230;P值均<0.05）。结论醛糖还原酶抑制剂zopolrestat调控了 NF-κB介导的炎症信号,明显减少了人支气管上皮细胞炎症因子的表达,明显减轻了小鼠气道高反应性及炎症细胞的浸润,减少了小鼠气道炎症因子的表达,减轻了屋尘螨诱导的小鼠气道炎症反应。