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目的:HIV-1持续性感染能诱导miR-146a的表达,miR-146a作为免疫系统负调控分子,通过靶向多个免疫系统关键分子,负调控免疫系统,而对于HIV-1感染来说,这种负调控则会被病毒利用,有利于病毒与宿主长期共存,并逐渐累积致病效应。这里我们利用CRISPR/Cas9技术敲除miR-146a,以探索在敲除miR-146a后,能否在一定程度上回复细胞因子,T细胞耗竭分子表达,从而增强免疫反应,抑制病毒复制。方法:首先我们设计了四条针对人前体miR-146a基因序列的gRNA,通过T7EN1实验和T载体测序实验来验证4条gRNA是否能有效编辑前体miR-146a基因。之后我们利用qPCR方法验证在LPS刺激下,验证HEK293T和A549细胞中敲除miR-146a的效果,还利用Western Blot和ELISA的方法检测了 TRAF6、IRAK1、细胞因子的表达变化。接着我们在HIV-1感染的MT2细胞中,利用qPCR技术、Western Blot技术、ELISA技术检测了不同时间点miR-146a、Gag,HIV-1限制因子 MxB、IFITM1、Tetherin,细胞因子 IL-1β、TNF-α、IFN-α、IFN-β 以及细胞上清中p24的表达变化,最后我们利用流式细胞术检测了 C11细胞中敲除miR-146a对HIV-1前病毒再激活是否有影响。结果:在HEK293T细胞和A549细胞中lentiCRISPR/Cas9 1#gRNA能够高效的编辑前体miR-146a基因序列,导致成熟miR-146a水平降低,LPS刺激下miR-146a的靶基因TRAF6和IRAK1显著增加。而miR-146a敲除使IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α细胞因子显著升高。在HIV-1感染的MT2细胞中,敲除miR-146a,细胞因子 IL-1β、TNF-α、IFN-α、IFN-β,HIV-1 限制因子 MxB、IFITM1、Tetherin均显著升高,而两个重要的T细胞耗竭标志PD-1和CTLA-4表达降低,最终抑制了 HIV-1的复制和前病毒的再激活。结论:我们的研究表明在HIV-1感染的细胞中CRISPR/Cas9能高效的阻断成熟miR-146a的表达,从而破坏了 miR-146a对细胞因子信号通路的负调控,使细胞因子和干扰素刺激因子表达显著上升,并回复了 T细胞耗竭标志物PD-1和CTLA-4的低表达,增强免疫反应,抑制HIV-1的复制和前病毒的再激活。这表明CRISPR/Cas9介导的miR-146a基因编辑为艾滋病基因治疗提供了可能性。