芒果皮提取物抑菌活性初步研究

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本文以金煌芒果皮作为原料,用甲醇和乙醇粗取,两种粗提物再用二氯甲烷和乙酸乙酯分别萃取,得到4种提取物。以水稻纹枯病菌和小麦纹枯病菌等10种植物病原真菌为供试菌种,对4种提取物的抑菌活性进行研究。主要结果如下:1.打孔法试验结果表明,在供试浓度为0.095 g干物质/mL下,只有甲醇-二氯甲烷提取物对稻瘟和棉花枯萎的抑菌圈明显。两种乙酸乙酯提取物在供试浓度为0.200 g干物质/mL下对小麦纹枯的抑菌圈明显。生长速率法结果表明,用丙酮做溶剂时,在供试浓度为0.012 g干物质/mL时,只有甲醇-二氯甲烷提取物对棉花枯萎、小麦赤霉和小麦纹枯病菌的抑制效果最好,抑制率分别为100%、90.9%和89.3%。当用无菌水和丙酮以体积比为3:1做溶剂时,只有甲醇-二氯甲烷提取物对小麦纹枯病菌的抑制效果较好,达到72.5%。两种乙酸乙酯提取物以丙酮做溶剂时,在供试浓度为0.100 g干物质/mL下对小麦赤霉、小麦纹枯和水稻纹枯病菌抑制效果显著,抑制率均为100%。番茄灰霉和草莓菌核两种病菌的对照在溶剂含有丙酮时均表现为长势畸形或菌落颜色不正常等症状。当两种乙酸乙酯提取物以无菌水为溶剂时,在供试浓度为0.100 g干物质/mL下对小麦纹枯病菌和水稻纹枯病菌的抑制效果显著,其次为小麦赤霉病菌,对3种病菌的抑制率都在80%以上,抑制效果与对照药剂50%多菌灵WP 1000倍100%的抑制率最相近。经毒力测定,甲醇-二氯甲烷提取物对小麦赤霉、小麦纹枯和水稻纹枯病菌的毒力相差不大,对小麦纹枯病菌的毒力较强,EC50为0.003632 g干物质/mL。乙酸乙酯提取物对3种病菌的毒力相差也不大,甲醇-乙酸乙酯提取物对小麦纹枯病菌的毒力较强,EC50为0.024330 g干物质/mL。组织筛选法实验结果表明两种乙酸乙酯提取物对水稻纹枯病菌的防治效果最好,治疗作用与50%多菌灵WP 1000倍100%的防治效果相当。考虑到提取物在培养基中的扩散情况,生长速率法比打孔法更能真实的表现提取物的活性。用丙酮做溶剂时对某些病菌生长有一定的影响,选无菌水做样品的溶剂。同时选乙醇-乙酸乙酯提取物进行下一步研究。2.成熟度不同,供试菌种不同,乙醇-乙酸乙酯提取物对菌种的抑制效果差异显著。3种成熟度的提取物对水稻纹枯的抑制作用无明显差异;青芒果对小麦赤霉抑制效果最好;半成熟和成熟对小麦纹枯的抑制效果最好。因此,选水稻纹枯病菌作为指示菌进行下一步研究。3.提取方法不同,乙醇-乙酸乙酯提取物的抑菌活性有一定的差异。振荡提取法提取的提取物对水稻纹枯病菌的抑制作用最好。提取温度对提取物的抑菌活性影响最大。在单因素实验的基础上,采用正交试验法设计,优化出最佳提取条件为:提取温度20℃,转速200转,料液比(v/v)1:5,提取时间2 h。4.以水稻纹枯病菌为指示菌,研究乙醇-乙酸乙酯提取物抑菌活性的稳定性。结果表明,提取物的抑菌活性对热和供试的4种金属离子(Ca2+、Mg2+、Fe2+、Fe3+)不稳定,但对紫外光、酸、碱以及金属离子Na+和K+稳定。5.综合相关文献报道和化学成分定性分析结果,表明乙醇-乙酸乙酯提取物含有黄酮类、糖及其苷类、酚类、有机酸和挥发油等成分。6.采用硅胶柱层析及生物活性测定相结合的跟踪测定方法对乙醇-乙酸乙酯提物进行分离。结果表明,洗脱液为60:40:20(正己烷:乙酸乙酯:无水甲醇)的体积比对提取物的分离效果最好,高活性物质集中在5,7,(8~10)和(11~13)4个组段之间,其中(11~13)组段的抑制效果显著,达到62.2%。7.定性分析结果表明(11~13)组段的化学成分主要为酚类、黄酮类和有机酸等物质,但具体是那一种活性物质起作用还需要进一步分离、纯化和鉴定。
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