鳜鱼是我国重要的鱼类养殖品种，而近年来传染性脾肾坏死病毒(infectiousspleenandkidneynecrosisvirus,ISKNV)对鳜鱼养殖造成了严重的经济损失。为了研究病毒与宿主的相互作用，本实验室构建了ISKNV感染鳜鱼的抑制性消减杂交cDNA文库基础。本论文针对一个Ly-6超家族成员的cDNA进行了进一步研究。 序列分析。该cDNA含有一个282bp的开放阅读框，编码93个氨基酸残基的蛋白质，预测分子量为10.3kDa,等电点为5.15。其中N端19个氨基酸残基为信号肽，成熟蛋白由74个氨基酸残基组成，预测分子量为8.2kDa，等电点为5.05。通过生物信息学的分析，发现该蛋白具有Ly-6/uPAR样结构域，即以亮氨酸或异亮氨酸为N端开始，具有8-10个保守的半胱氨酸，属于Ly-6SF的家族成员。预测定位于细胞外，无GPI锚定信号，为分泌型蛋白。从系统进化的距离，基因的结构，以及蛋白三维结构的同源建模来看，该蛋白跟Ly-6SF的一个重要成员CD59具有很大的相似性。猜测可能具有补体调节的功能。因此，我们将其命名为Lypn(Ly-6/protectin)。 基因全长的克隆。用反向PCR方法克隆了该基因的全长，lypn基因含有4个外显子和3个内含子，上游侧翼区域含有几个潜在的转录因子结合位点，如AP-1，NF-KappaB，V-Mvb和GATA-1等。这些转录因子多跟血细胞的分化、增殖密切相关。 基因在ISKNV感染后的表达谱。用半定量RT-PCR研究了lypn基因在ISKNV感染鳜鱼后的不同时段、不同组织内的表达模式。结果表明，在健康情况下，Lypn可在鳜鱼脾脏和血细胞中表达，而在心、肝、头肾、后肾、脑、鳃和卵巢中则检测不到。鳜鱼在ISKNV感染后的第4天，心、肝、脾、头肾、后肾、脑、腮和卵巢等组织均无法检测到Lypn的表达；第11天，在肝、鳃和卵巢出现了较弱的表达条带；第15天时，鳜鱼处在ISKNV感染后的康复阶段，Lypn在肝、脾、头肾、后肾、脑和卵巢均有表达。 重组蛋白的表达。为了研究其功能，及寻找与其相互作用的蛋白质，我们进行了Lypn的重组表达。分别以pMal-c2x和pGEX-4T-1质粒为载体构建了重组质粒pMal-lypn和pGEX-lypn，转化BL21(DE3)细菌，获得了目的蛋白的表达. 活性测定模型的构建。我们从补体激活的经典途径出发构建了鳜鱼补体溶破红细胞系统模型，为研究Lypn是否具有抑制补体的活性奠定了基础。 上述研究结果，表明lypn基因的表达在ISKNV感染后有较大的变化，可能对病毒感染进程及感染的后果有较大的影响。我们对其进行了重组表达，获得了可溶的重组蛋白，为其功能研究打下了基础。