家蚕核多角体病毒p10和p35基因的克隆与特征研究

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该研究选用8株家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus,BmNPV)为实验材料,它们分别是非洲的埃及株和中国的镇江株、山东株、安徽株、徐闻株、遂溪株、翁源株、广州株,提取其DNA为模板,根据已报道的BmNPVT3株(Najima,K.and Maeda,S等,1999)中 p10 基因和 p35 基因编码区侧翼的保守序列,用 GeneFisher 软件分别设计了一对特异性引物,利用PCR扩增技术得到 8 株 BmNPV 的 p10 基因和 p35 基因.通过 T-A 克隆法克隆到pGEM-T easy 载体中,转化进宿王菌E.coli DH5 a 或 E.coli TOP10中,在含有Amp+IPTG+X-gal的LB选择性平板上经蓝白斑筛选法筛选出插入目的基因的重组体,PCR鉴定扩增出与目的基国大小相同的片段,对重组质粒进行序列测定和分析,并与GenBank上已经注册的NPV的p10基因和p35基因分别进行比较分析,进而对该研究获得的8株BmNPV的p10基因和p35基因在NPV中的分子系统进化地位进行了分析预测.
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