rmh-TNF工程菌经全面检定,确认构建正确,目的蛋白占菌体总蛋白的百分含量大于30%,菌种保持稳定,完全符合大肠杆菌特征,该菌适用工程菌菌库。根据rmh-TNF的表达,使用单因素法对由rmh-TNF在大肠杆菌中表达时的诱导时机、诱导维持时间、pH值、溶解氧等进行了研究,选择出较好的发酵工艺参数,确定最佳诱导时机为OD值0.8-1.0,诱导维持时长为3.5小时,pH值在6.8-7.0,溶解氧维持在大于40%。根据rmh-TNF代谢特点,优化发酵补料培养基,利用多因素、多水平正交设计实验研究了补料培养基配方中碳源氮源比例对发酵水平的影响,根据发酵结果得到补料培养基配方:100克胰蛋白胨、50克酵母提取物。通过对补料工艺的研究,确定了注射用重组改构人肿瘤坏死因子发酵罐发酵开始诱导后高温灭菌的补料培养基以流加的方式对发酵罐进行补加的新补料工艺。结果表明:采用优化补料工艺后使rmh-TNF占菌体干重比例平均保持在255.8 mg/g左右,比原工艺培养基提高了41.5%。