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‘磨盘柿’是中国优质涩柿的典型代表,为解决其育种障碍,有效利用这一资源,本文对‘磨盘柿’杂种的败育特性、败育细胞学机制及挽救体系进行了系统研究,主要取得了以下研究结果:1.基本弄清了‘磨盘柿’杂种的败育特性
以三个日本甜柿品种‘西村早生’、‘太秋’、‘花御所’为父本,通过调查杂交‘磨盘柿’的杂种发育状况,发现经人工授粉后可以形成种子,但形成的杂种数量会受到父本基因型的明显影响,完全甜柿‘花御所’作父本得种数极少;‘磨盘柿’杂种的异常比例极高,败育主要分为始于授粉后35d的早期败育和开始于授粉后60d的晚期败育两种类型。早期败育表现为胚乳的早期退化,种脐处出现的异常突起引发了大量种子的晚期败育。早期败育型杂种约占发育种子的15%左右,晚期败育型杂种占发育种子的60~85%。杂种败育和胚的败育之间不存在明显同步性,可以借助胚挽救技术获得杂种幼苗。晚期败育型的挽救在授粉后60~70d进行,而早期败育型在授粉后35~40d。
2.从母本育性角度及胚胎发育过程方面探讨了杂种败育的细胞学机制通过对‘磨盘柿’子房、胚囊及杂种的定期取样调查和制片,建立了子房外观发育形态与内部组织学发育的相关性,明确了‘磨盘柿’胚囊的自然发育进程、退化过程和胚胎发育进程;指出珠孔部的外珠被发育异常是‘磨盘柿’所特有的,推测其与异常突起杂种发生之间有一定的关联,可能是导致‘磨盘柿’杂种晚期败育的主要原因;‘磨盘柿’早期败育型杂种的发生是由初生胚乳核分裂异常引起的,而晚期败育型杂种胚胎的胚乳没有明显的异常现象,推测其胚的横生或斜生着生状态是由于珠被的发育异常引发。
3.建立了晚期败育杂种成熟萌发及壮苗生根的技术体系以‘西村早生’为父本,对杂交后70d的‘磨盘柿’合子胚进行了挽救培养。利用正交试验法研究了改良MS培养基中N的浓度、蔗糖浓度、激素BA和IBA浓度四个因素及其组合对‘磨盘柿’合子胚萌发、生根及成苗的综合影响,确定了最佳的萌发培养基条件是以(3/4N)MS为基本培养基,添加0.44μMBA和0.1μMIBA,蔗糖最适浓度为50g.L-1;针对胚萌发培养后幼苗生长表现的几个问题,采用黑色培养基、短截主根的方法增加了侧生分根,又通过无糖培养提高了普通幼苗的自养能力。这些壮苗措施使幼苗的移栽成活率从87%提高到98%以上。
4.建立了适宜早期败育杂种挽救的胚珠培养应用操作程序以‘西村早生’为父本,针对‘磨盘柿’花后35d的早期败育型杂种,将挽救过程分为四个阶段,并通过正交试验设计确定了不同培养阶段的最佳培养基条件,最终建立了一套基于胚珠培养的胚挽救程序:将授粉35d的胚珠接种在胚珠发育培养基(EDM:MS(1/2NO3)+IAA11.42μM+BA2.22μM+GA31.44μM+70g.L-1蔗糖)上,经15d培养后将胚(发育至心形期)剥出,在裸胚发育培养基(ODM:MS(1/2NO3)+IAA2.85μM+BA4.44μM+70g.L-1蔗糖)上培养20d,而后再将之转接到胚萌发培养基(OGM:MS(3/4NO3)+IBA0.1μM+BA0.44μM+50g.L-1蔗糖)。依照这套培养程序可以使49%的胚珠得以挽救成功并最终成苗。