水葫芦生防菌Alternaria sp.WH56的分离、鉴定与生物学特性

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水葫芦(Eichhornia crassipes)的恶性蔓延在世界范围内是一个公认的、严重的环境问题。目前,利用水葫芦病原菌对其进行治理越来越受到重视。本文从浙江省感病的水葫芦植株上分离得到一株致病力较强的菌株Alternaria sp.WH56。在确定WH56菌株对水葫芦致病特性的基础上,对其生物学特性进行了研究,并进一步从分子水平上分析了其与国际上公认的水葫芦强效致病菌Alternaria eichhornaria之间的遗传关系。选取ITS区,eg基因,ssu区,hk基因和gpd基因这五个序列进行分析,分别对两个菌株测序,并与Genbank上登录的链格孢属其他种的相应序列比对。结果如下:Alternaria sp.WH56菌株接种水葫芦7天后的发病率为100%;接种7天、14天、21天和28天后的病情指数分别为46.47%、75.38%、85.71%和100%。Alternaria sp.WH56菌分生孢子梗单生,罕分枝,淡褐色,分隔,直或屈膝状弯曲,53.4-96.7×3.8-6.2μm;分生孢子单生,罕短链(2-3孢子)生,褐色,倒棒状或近椭圆形,具横隔膜2-5个,纵、斜隔膜1-4个,分隔处略缢缩,孢身35.26-55.5(43.8)×9.7-18.0(13.3)μm;喙柱状,与孢身之间分界不明显,淡褐色,不分隔,5.1-26.3×2.5-3.5μm。据此将其初步鉴定为链格孢属。在PDA培养基上Alternaria sp.WH56菌落呈鲜红色,产水溶性红色菌素。光暗交替和全光照有利于菌落生长;光暗交替条件下菌落呈深红色,光照条件下呈鲜红色,黑暗条件下呈微粉色。该菌在25℃下最适宜保持活力地长期生长;致死温度为56℃,10min;最适宜生长的pH条件为中性偏碱性;在不同培养基上菌落形态有所不同,最适培养基依次是PDA、PDAY和MDYEA;该菌最适利用的碳、氮源分别为葡萄糖和硝酸钠。根据ITS区,eg基因,ssu区,hk基因和gpd基因序列构建的系统发育树均表明,Alternaria sp.WH56与Alternaria eichhornaria具有极高的同源性,相应序列的相似性分别为100%(449/449bp)、99.06%(420/424bp)、99.43%(524/527bp)、98.36%(1322/1344bp)和100%(524/524bp)。WH56菌株的生物学特性和系统发育树分析均表明,可以基本认为Alternaria sp.WH56就是Alternaria eichhornaria。综上所述,本文分离得到的水葫芦生防菌Alternaria sp.WH56具有开发成为水葫芦真菌除草剂的潜力。该研究对我国外来植物的生物防治具有积极的意义。
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