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目的建立齐留通(Zileuton)及相关内源性代谢产物的含量测定方法,结合药动-药效学模型,研究5-脂氧合酶(5-LOX)抑制剂的药效学评价方法,初步探索Zileuton产生药效的作用机制及其起效的时间范围,为5-LOX抑制剂的进一步研究提供理论依据,为新药研发与临床用药提供新思路。方法采用超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS)联用技术,建立Zileuton及5-LOX相关内源性代谢产物(AA、LTA4、LTB4、LTD4)含量的测定方法,并测定上述物质的动力学行为;采用卵蛋白雾化与激发,建立大鼠哮喘模型,通过记录大鼠一般状态、气道噬酸性粒细胞比例、组织病理学、肺泡灌洗液中IL-4和IFN-γ以及血清中特异性IgE水平的改变,验证哮喘模型并考察Zileuton药效作用;以单次和多次两种给药方式,给予大鼠含53 mg/kg、106 mg/kg、212 mg/kg三种剂量的Zileuton胶囊,记录模型验证指标,并测定单次给药后Zileuton及AA、LTA4、LTB4、LTD4的动力学行为。结果Zileuton标准血浆样品浓度在0.01~50.00μg/mL范围内线性良好,最低检测限为0.01μg/mL,齐留通日内、日间精密度(RSD)均小于10%,AA、LTA4、LTB4、LTD4的RSD均小于15.00%,血浆样品中齐留通低、中、高浓度的提取回收率分别为(85.1±6.28)%、(83.2±3.47)%、(83.4±4.73)%;不同剂量的Zileuton与AA、LTB4、LTD4的含量变化无明显差异,与LTA4的含量变化有显著差异,具有统计学意义;通过记录大鼠一般状态、气道噬酸性粒细胞比例、组织病理学、肺泡灌洗液中IL-4和IFN-γ以及血清中特异性IgE水平的改变,验证哮喘模型建立成功;单次给药试验中,给予不同剂量的Zileuton后,健康大鼠中LTA4含量增多,且高剂量组增加明显,哮喘大鼠中LTA4的含量迅速降低,8 h后开始逐渐恢复,24 h时,LTA4的含量均低于给药前;多次给药试验中,低剂量组各项验证指标与哮喘组相比无显著性差异(P>0.005),中剂量组与高剂量组各项验证指标与哮喘组相比有显著性差异,差异具有统计学意义(P<0.005),且高剂量组各项验证指标与中剂量组相比差异性较小。结论本试验采用甲醇沉蛋白法对血液样品进行前处理,通过UPLC-MS联用技术,成功建立了大鼠血浆样品中Zileuton及AA、LTA4、LTB4、LTD4的检测方法。结合药动-药效学试验及5-LOX抑制剂的作用机制,得出LTA4可作为Zileuton药效学评价指标,Zileuton通过下调LTA4的表达水平,减轻大鼠哮喘炎症反应,从而治疗哮喘疾病,药效时间为0~8 h。对比Zileuton三种剂量的药效学试验结果,表明低剂量组未减轻炎症反应,中剂量与高剂量组均可治疗哮喘,且差异较小,由于高剂量组中LTA4表达增多,副作用较大,故106 mg/kg为Zileuton的最佳剂量。本试验通过研究5-LOX抑制剂药效学的评价方法,得到新的评价指标,初步确定5-LOX抑制剂产生药效的作用机制及时间范围,为新药研发与临床用药提供新思路。