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食用菌是人类食物的重要组成部分,含有许多对人类健康有益的活性物质。目前对于食用菌的抗氧化研究主要集中在多糖大分子上,对其中的抗氧化小分子的研究相对较少。有研究表明,食用菌中含有结构不同的抗氧化小分子物质。本课题通过抗氧化测定方法评价红乳牛肝菌,鹿茸菌,鸡枞菌,双孢菇的抗氧化活性,从中选出抗氧化活性高的食用菌,分离鉴定其中的不同结构的抗氧化小分子物质,同时深入研究它们之间的协同作用。
本研究选择了红乳牛肝菌,鹿茸菌,鸡枞菌,双孢菇四种食用菌的干子实体,经70%乙醇(v/v)处理得到各种提取物,在抑制脂质过氧化实验体系中测定各提取物抗氧化活性,在终浓度为250μg/ml时,红乳牛肝菌、鹿茸菌、鸡枞菌、双孢菇提取物的抑制活性分别为70.5%,69.4%,7.5%,20.2%,其中鹿茸菌和红乳牛肝菌提取物具有较强的抗氧化活性,选择它们进行深入研究,最终从这两种食用菌中得到两种不同的抗氧化小分子物质:鹿茸菌提取物经有机试剂萃取、聚酰胺柱层析、高效液相色谱等方法得到C3A,并通过聚酰胺TLC和HPLC鉴定其为原儿茶酸;红乳牛肝菌提取物经过树脂NKA-9,制备型硅胶(PTLC),高效液相色谱法等方法得到G3H,然用高效液相色谱,质谱,红外光谱进一步鉴定分析,表明G3H为色氨酸。
抗氧化活性测试显示,C3A终浓度为250μg/ml,对鼠红细胞溶血的抑制率为66.7%;G3H终浓度为250μg/ml时,对红细胞溶血的抑制率为76.1%;C3A终浓度在50μg/ml时,对DNA氧化损伤抑制率为85%;G3H终浓度在100μg/ml时,对DNA氧化损伤抑制率为67.3%;并且二者保护DNA氧化损伤的能力都超过了标准抗氧化剂VE和VC。构效分析推测,酚类物质苯环结构上的-OH的位置和数目可能决定了其抗氧化活性;色氨酸中供氢性质的吲哚基团决定其抗氧化活性。
在抑制鼠红细胞溶血的实验中,将C3A和G3H进行复配,它们具有明显的协同增效作用,并且这种协同作用受抗氧化剂组合比例的影响,当二者比例为2:3时协同增效作用最明显。并且以此比例组成的复合物在抑制DNA氧化损伤试验中的活性高于G3H单独使用时的活性,说明该复合物是比G3H更高效的抗氧化剂。
本研究不仅为食用菌的抗氧化小分子物质的开发和利用奠定基础,同时也为寻找高效安全的复合抗氧化剂的提供依据。