目的：　　T淋巴细胞识别特定T细胞受体（TCR）中的抗原肽，并在人类适应性免疫应答中发挥重要作用。由于同卵双胞胎具有相同的遗传背景和共同的生活环境，因此他们已成为研究疾病易感性和预后的首选群体。慢性感染和自身免疫疾病往往会导致TCR的分布发生偏移，Vβ的选用也会相应增加，如感染HIV的病人产生的初次免疫应答中CD8+T细胞的Vβ的选用明显增加。为了研究相关Vβ基因与慢性感染和自身免疫疾病中TCR谱系的关系，当前的TCR谱系的相关研究需要一种能够沉默某种Vβ基因表达的动物模型。我们研究的主要目标是：　　1.通过研究具有不同结果的慢性乙型肝炎同卵双胞胎中的T细胞概况来确定慢性感染结果的T细胞模式。　　2.通过CRISPR/Cas9技术建立部分Vβ基因表达沉默的小鼠模型。　　方法：　　1.从西南医院招募了10对同卵双胞胎，其中3对是健康供者，6对一致感染慢性HBV，1对一人感染慢性HBV，另一人健康。我们用密度梯度离心法分离外周血单核细胞（PBMC）。之后流式分选不同种类的T细胞并提取RNA将其RNA逆转录为cDNA。用多重PCR法对TCRβ链CDR3区序列进行扩增，利用高通量测序获得序列信息后与IMGT数据库比对进行分析。　　2.针对Trbv13-3、Trbv19基因编码序列分别设计向导RNA(single guide RNA, sgRNA)，制备相应质粒，将表达sgRNA和cas9蛋白的质粒用Lipo2000转染进小鼠成神经瘤细胞N2A中，通过药物筛选获得细胞库。经过单克隆测序检测细胞库中基因组的突变效率，筛选出效率最佳的sgRNA。体外转录获取sgRNA和Cas9mRNA，进行小鼠受精卵的显微注射，提取出生的小鼠的基因组DNA进行测序鉴定。　　结果：　　1.我们发现在每对双生子中CD8+T细胞的TCRβ中V和J片段使用频率之间存在强相关性。当比较V段使用率和V-J组合使用率时，双胞胎对之间的库谱相关性显着高于非双胞胎之间的相关性。持续的免疫反应将在同卵双胞胎中维持更相似的免疫储存库结构，而在非同卵双生中则不然。除相同的遗传因素外，慢性持续感染也促进了免疫库谱中的等级相似性。HBV感染双胞胎之间的共享克隆数高于非HBV感染双胞胎。　　2.T7EN1实验和T-A克隆测序结果显示Trbv13-3、Trbv19sgRNA有较高的切割效率。6号小鼠Trbv13-3和Trbv19基因各有1个bp的增加和减少，形成移码突变，Trbv13-3和Trbv19基因的表达被破坏。　　结论：　　1.数据显示在平均TCRVβ片段表达和互补决定区3（CDR3）模式的频率以及偏斜或寡克隆克隆型方面，每对的TCR库谱存在高度相似性。值得注意的是，双胞胎TCRVβ表达的相似性水平似乎与慢性HBV感染的一致性或不一致性无关，尽管详细的CDR3模式和频率与疾病预后相关。HBV抗原血清转换患者中存在更多的免疫显性克隆型，这些显性克隆型的丰度有所增加。这些免疫显性克隆型可以用作有利的预后生物标记和免疫治疗的潜在靶标。　　2.我们成功利用CRISPR/Cas9技术构建出了Trbv13-3、Trbv19两种基因敲除的小鼠，为今后这方面的实验需求提供了有利的模型基础。