银杏雄株叶片和花粉中黄酮类化合物的提取、检测与分析

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我国是银杏的故乡,银杏资源丰富,银杏雄株叶片与花粉是开发利用银杏功能性成分的重要资源。银杏黄酮类化合物是重要的功能性成分。针对目前国内外市场对银杏功能性成分开发利用的需求及其研究进展,研究银杏雄株叶片和花粉中黄酮类化合物的提取与检测技术及筛选高含量功能性成分的雄株具有重要的理论意义与应用价值。本研究连续两年分别于花期和7月-9月间随机选取我国银杏主要产区扬州市及徐州市的87株银杏雄株的叶片与花,采用正交设计优化提取处理组合和RP-HPLC等技术与方法对其黄酮类化合物进行提取并检测分析,对银杏雄株叶片与花粉的黄酮类化合物含量分别进行聚类分析。取得的研究结果主要有:1、供试银杏雄株的叶片和花粉两者间槲皮素、山奈黄素和异鼠李素三种黄酮苷的含量差异较大,叶片中分别为0.595 %、0.566 %和0.44 %;花粉中分别为0.081 %、2.196 %和0.060 %;其总黄酮苷的含量分别为1.601 %和2.187 %。银杏雄株叶片的总黄酮苷含量与叶片厚度、SLW呈极显著正相关,其叶片厚度、SLW可作为评价银杏叶片中黄酮类化合物含量水平的重要指标。2、银杏雄株花粉中总黄酮苷的含量高于叶片,主要表现为山奈黄素苷含量相对较高,叶片和花粉两者间总黄酮苷含量的相关系数为0.9270*,呈显著正相关。3、选择影响银杏黄酮类化合物提取的溶剂浓度、料液比、提取温度及提取时间为主要作用因子,分别设计3个处理水平,采用正交试验设计[L9( 34)]优化银杏雄株黄酮类化合物提取体系,结果表明:70 %的乙醇、1∶15的料液比、80℃的提取温度、40 min的超声提取时间为银杏雄株黄酮类化合物提取的最佳组合。4、选用水溶剂提取银杏黄酮类化合物,经正交试验设计[L9( 33)]优化提取体系,结果表明:1∶15的料液比、80℃的提取温度、60 min的超声提取时间为银杏雄株黄酮类化合物水提取的最佳组合。银杏雄株叶片的黄酮类化合物的乙醇提取得率为2.32 %,水溶剂提取得率为0.396 %,具显著差异。5、采用液氮-沸水温差法对银杏花粉进行破壁处理,银杏花粉中黄酮类化合物可得到有效提取。6、应用银杏黄酮类化合物提取的优化体系,经对供试样品超声波提取、石油醚及正己烷萃取、离心,银杏雄株叶片和花粉中黄酮类化合物可得到有效分离。7、采用ADS-17大孔树脂吸附、吸附时间为30 min、70 %乙醇溶液为洗脱液、洗脱液流速为1 ml/min、洗脱量为3倍树脂床体积,银杏雄株叶片和花粉中黄酮类化合物可得到有效纯化。8、RP-HPLC检测分析结果表明,供试银杏雄株间的各黄酮苷含量和总黄酮苷含量均存在显著差异,构建的银杏雄株叶片和花粉中黄酮苷元的HPLC指纹图谱是评价银杏雄株叶片和花粉中黄酮类化合物含量水平的主要依据。9、供试银杏雄株叶片中总黄酮苷含量聚类分析取阈值15时,可分为3类,其中Ⅰ类67株,Ⅱ类15株,Ⅲ类5株,其黄酮苷含量分别为1.542 %、2.082 %和0.951 %。银杏雄株花粉中黄酮苷含量聚类分析取阈值13时,同样可分为3类,其中Ⅰ类48株,Ⅱ类38株,Ⅲ类1株,其黄酮苷含量分别为1.658 %、2.845 %和4.161 %。10、本试验条件下,银杏叶片和花粉中黄酮苷含量>2.00%的雄株按照含量由高到低依次为49号、10号、85号、2号、5号、39号、11号、4号、12号、80号、74号、69号、59号。上述研究结果为银杏雄株叶片和花粉的功能性成分的开发利用提供了重要的理论依据与技术支撑。
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