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一、目的：
以脑得生为模型药物,研究制备脑得生口服微乳,建立脑得生口服微乳的质量评价体系,以提高复方中难溶性药物的溶解度,并考察O/W型微乳同时载多极性复方药物的成型工艺,为微乳在中药复方递药系统中载药应用研究提供新的思路及研究方法。
二、方法：
1.脑得生有效成分的提取、分离和纯化
红花提取工艺:红花药材于40℃恒温干燥3h,取红花500g,加12倍量的水浸泡40min后于60℃温浸提取30min,过滤,滤渣加10倍量的水于相同温度下继续温浸提取30min后过滤,合并二次滤液。滤液60℃水浴浓缩至药液浓度约为0.5g·mL-1。
红花分离纯化工艺:按5:1的树脂/药材比将浓缩药液过D-101型大孔吸附树脂,树脂径高比为1:8,上柱液pH用浓盐酸调至3左右,药液吸附流量为4BV/h。用15BV水以7BV/h流量清洗除去多糖等杂质。然后用11BV50％乙醇溶液以8BV/h流速洗脱并收集洗脱液,60℃水浴浓缩回收乙醇至药液体积与上样量约相等。
川芎提取工艺:川芎饮片于60℃恒温干燥3h,粉碎过8目筛,取川芎粉末500g,加10倍量75％乙醇于40℃温浸提取3h,隔时搅拌,过滤取滤液,重复实验3次。合并滤液,减压浓缩(浓缩温度55～60~C℃)至含生药约为0.2g·mL-1,抽滤,静置12h,取上层清液,抽滤,取上层清液。
从各专业提取物生产公司购买三七总皂苷提取物(赠送),葛根总黄酮提取物,山楂总黄酮提取物。
2.“水相”的配制
以微乳含水量50％,一天给药二次,一次给药10mL,一天给药总量等同于2005版《中国药典》脑得生片一天给药生药材有效成分70％转移率换算,配制含水溶性成分的“水相”溶液,做为微乳处方筛选的水相。
3.脑得生口服微乳的处方筛选
以大豆油、中链(C8～C10)脂肪酸甘油脂、十四酸异丙酯、油酸乙酯、三油酸甘油酯和油酸为油相,以吐温80、吐温20和聚氧乙烯氢化蓖麻油40为表面活性剂,以1,2-丙二醇、异丙醇、无水乙醇和正丁醇为助表面活性剂,绘制伪三元相图,筛选微乳区域面积较大的处方系统；以微乳离心及短期放置稳定性、平均粒径及粒径分散指数、微乳载药后药物对微乳粒径的影响、微乳载药量与黏度的关系、载药微乳短期放置稳定性等实验优选最终微乳处方。
4.脑得生口服微乳的质量评价
建立HPLC法测定脑得生口服微乳中各指标成分的含量；以肉眼及倒置显微镜观察脑得生口服微乳的外观和形态；以离心法、稀释法和电导率法对脑得生口服微乳进行鉴别；以NANO-ZS90纳米粒度分析仪测定脑得生口服微乳的平均粒径及粒径分布；以NDJ-7型旋转式黏度仪和DDS-11A型电导仪分别测定脑得生口服微乳的黏度和电导率；影响因素试验、加速试验和长期试验考察脑得生口服微乳的稳定性。
三、结果：
1.脑得生药材提取物有效成分的含量测定
红花分离浓缩液含羟基红花黄色素A1.45mg·mL-1；川芎水提取物含盐酸川芎嗪78.67μg·mL-1；三七总皂苷提取物以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1计含总皂苷76.83％；葛根总黄酮提取物含葛根素72.53％；山楂总黄酮提取物以芦丁计含总黄酮75.90％。
2.“水相”的配制
水相含三七总皂苷约4.9 mg·mL-1、羟基红花黄色素A约1.1mg·mL-1、川芎嗪约15μg·mL-1。
3.脑得生口服微乳的处方筛选
伪三元相图影响因素实验筛选了油酸乙酯/RH40/1,2-丙二醇/水相和油酸乙酯/吐温80/1,2-丙二醇/水相两个处方体系；处方优选的最终结果为[油酸乙酯:RH40:1,2-丙二醇:水相=3.19:17.04:8.52:71.25(m/m/m/m)]:葛根总黄酮:山楂总黄酮=1:14.74:0.53(v/m/m)。
4.脑得生口服微乳的质量评价
脑得生口服微乳含葛根素10.78mg·mL-1、羟基红花黄色素A1.01mg·mL-1、人参皂苷Rg11.73mg·mL-1；体系为澄清透明、均匀红褐色的O/W型微乳；平均粒径为10.620nm,多分散系数为0.278；黏度为27mpa·s,电导率为194.9μs·cm-1；影响因素试验、加速试验和长期试验结果表明,脑得生口服微乳中葛根素、人参皂苷Rg1含量稳定,羟基红花黄色素A在光照及60℃条件下不稳定,易分解,含量急速下降,这主要是羟基红花黄色素A本身对光照及温度敏感不稳定所致,与微乳的稳定性无关。
四、结论：
1.在O/W型脑得生口服微乳内油相包载脂溶性较强的葛根总黄酮、山楂总黄酮提取物时,可在外水相溶解水溶性的三七总皂苷、红花黄色素及川芎水溶性成分；脑得生微乳可成型且稳定。
2.O/W型微乳在溶解复方多极性药物成分的同时可提高难溶性成分的溶解度。