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蒙古沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)是内蒙古等西北荒漠区特有的强抗逆阔叶灌木。用RNA-Seq技术分析表明,其DREB类转录因子AmDREB2C和叶绿体ATP合酶δ亚基基因AmAtpD在低温和干旱胁迫下表达量显著上调。为了研究其在抗逆性中的功能和作用机理,我们对这两个基因进行了克隆和表达分析,并对AmDREB2C进行了转基因功能验证,得到如下主要研究结果:(1)采用PCR方法扩增到AmDREB2C编码区cDNA与gDNA,经测序发现均由1191bp组成,因此无内含子序列;推测其编码蛋白由396个氨基酸残基组成,分子量为43.80kDa,等电点为4.72,含1个AP2结构域和1个核定位信号,定位于细胞核。(2)AmDREB2C的表达受低温和干旱胁迫的显著诱导,尤其在低温胁迫下其诱导表达较为持久且强烈。(3)将AmDREB2C编码区cDNA片段分别构建超表达载体和诱导表达载体,并利用农杆菌介导法转化拟南芥。通过对转基因株系进行表型鉴定,发现AmDREB2C在耐低温、高温和干旱胁迫中起显著正调节作用,并且转基因株系对外源ABA敏感性增强,对耐盐性无明显作用。此外,超表达该基因无生长延滞现象,并且与诱导表达在提高抗逆性上无明显差别。(4)采用PCR方法扩增到AmAtpD的编码区cDNA和gDNA,经测序发现均由720bp组成,表明该基因无内含子序列;预测其编码蛋白含239个氨基酸残基,分子量为27.00kDa,等电点为9.67,具有亲水性,不是跨膜蛋白,定位于叶绿体。(5)将AmAtpD编码区cDNA片段构建到植物超表达载体上,并通过农杆菌介导法获得转基因拟南芥,为进一步鉴定其功能奠定了基础。