论文部分内容阅读
庆大霉素(gentamicin GM)是一种常用的氨基苷类抗生素(aminoglycoside antibiotics AmAn)，因其对革兰氏阴性杆菌具有较强的杀灭作用，曾被广泛应用于临床。但是，由于本药物具有显著的耳毒性等副作用，使其临床应用和发展受到了极大的限制。近年有文献报道，AmAn致聋机理是该类药物在体内与铁离子结合形成复合物，催化产生自由基，后者引起一系列过氧化反应，从而损伤内耳组织。某些自由基清除剂和铁螯合剂可以拮抗或减轻豚鼠氨基糖苷类抗生素耳毒性作用，并且有望应用于临床，从而拓宽了AmAn抗感染的适用范围。有人研究认为，赖氨匹林(商品名：来比林)(Lysisin aspirin,LAP)和白藜芦醇(Resveratrol,Res)是有效的抗氧化剂，可以抑制自由基的产生。来比林进入体内后能够立即分解，产生水杨酸和赖氨酸，它比直接使用水杨酸更为安全可靠，可通过直接或者间接的作用抑制自由基。在我国白藜芦醇的资源十分丰富，许多中草药和植物中都含有白藜芦醇。本文着重研究这两种药物对庆大霉素(GM)毒性的拮抗作用及其有关的机理。 第一部分 一、来比林(LAP)拮抗庆大霉素耳毒性的实验研究 本研究主要观察LAP对GM耳毒性的拮抗作用及其与自由基的关系。选用健康雄性杂色豚鼠48只，随机分为4组，采用听性脑干反应(Acoustic brainstem response,ABR)、耳蜗铺片及透射电镜技术，观察用药前后听阈及形态变化，测定耳蜗和肾皮质组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOb)含量，检测血清尿素氮和肌酐以及血清GM浓度，第四军医大学硕士学位论文观察LAP对庆大霉素耳毒性的拮抗作用及探讨其有关机理。实验结果: 1.听力改变 GM组:8 kHzABR闽移逐渐达到40一80dB;GM+LAP组:}阂移为15一35dB，差异显著(P<0.01)。GM组高频听力损失t匕低频重，第4周1 kHz和8 kHz平均阂移分别为28 dB和42 dB，有显著差异(P<0.01)。对照组和LAP组的反应IkJ始终稳定。 2.耳蜗铺片 GM组底圈毛细胞损伤最重，向上逐渐减轻，提示与听闭升高的程度相平行。第19天GM组底圈和第二圈外毛细胞损失大半，而GM+LAP组相对较轻。基底膜第二圈透射电镜见GM组外毛细胞胞浆空化，胞膜皱缩，有较多次级溶酶多泡体，甚至破裂;血管纹边缘细胞的突起中线粒体空化。GM+LAP组胞浆细胞器丰富，出现次级溶酶多泡体;血管纹细胞改变不明显。 3.MDA含量和SOD活力 第9、19天GM组血清的MDA含量高于GM+LAP组，差异显著(P<0.05);注射庆大霉素后GM组和GM+LAP组耳蜗组织SOD活力均显著升高(P<0.01)。 4.GM+LAP组血清尿素氮(BUN)和肌配(Cr)明显低于GM组; 5.GM组和GM+LAP组血清庆大霉素浓度无显著差异;实验结论: 1.注射庆大霉素使豚鼠ABR反应闽明显上升，尤其是高频部分，而同时注射LAP可以减少闽移。 2.注射庆大霉素使豚鼠基底膜毛细胞发生变性坏死，底圈比顶圈重，而同时注射LAP可以减轻庆大霉素对毛细胞的损伤。 3.注射庆大霉素使豚鼠血清肌配尿素氮水平升高，LAP可使肌醉尿素氮水平降低。提示其对庆大霉素的肾毒性也有拮抗作用。 4.同时注射GM和LAP对血清庆大霉素浓度无影响。第四军医大学硕士学位论文 5.LAP可抑制注射庆大霉素引起的豚鼠血清MDA浓度升高。 6.庆大霉素的肾毒性与自由基的关系尚待进一步研究。二、庆大霉素与来比林的配伍观察 在生理盐水中混合两种药物，观察在25℃，37℃下混合后药物的颜色有无变化，是否有沉淀产生，混合后旋光度是否改变。探讨药物的配伍安全。实验结果: 1.分别在25℃和37℃下，试液颜色无变化，无沉淀产生。两组试液pH值无明显差异。 2.混合试液与单纯药物溶液之间的旋光度无明显差异。实验结论: 1.混合后药物的含量、pH值、颜色、及澄明度均无变化。 2.药物混合后并不影响混合前的药效。 3.来比林可以和庆大霉素在0.9%的生理盐水中配伍。三、混合给药后的ABR检测以及耳蜗铺片观察 两种药物混合一次给药。两种药物均为临床使用剂量，观察两种药物在临床剂量下混合给药的安全性和有效性。健康杂色雄性豚鼠20只，随机分为两组，GM组:12m留kg，每日一次皮下注射，GM+LAP组:GM 1 Zm留kg+LAP 1 35m眺g，每天一次混合皮下注射。实验结果: 1.GM组不同频率下的ABR闭移分别为:IkHz 15一18dB，skHz17一ZOdB，GM+LAP组的阂移分别为:IkHzg一15dB，skHz 10一15dB。两组间差异显著(尸<0.05) 2.耳蜗铺片结果显示: 耳蜗铺片GM组底圈毛细胞有损伤，与正常组比较排列不整齐，毛第四军医大学硕士学位论炙细胞损伤向上逐渐减轻，提示与听闽升高的程度相平行。而GM十LAP组的毛细胞排列整齐，无损伤。实验结论: 1.单独注射正常量庆大霉素4周使豚鼠的高频ABR升高，混合注射GM十LAP后对豚鼠的ABR影响不明显。 2.注射正常量庆大霉素使豚鼠耳蜗毛细胞有损伤，底圈比顶圈重，与正常组比较，毛细胞排列紊乱。而同时注射GM+LAP可以减轻庆大霉素对毛细胞的损伤。与正常?