大豆异黄酮的主要成分是daidzein、genistein和glycitein三种游离型及其9种相应糖甙，由于3种游离型与17β-雌二醇的化学结构部分相似，学者们推测，二者的苯环都可以与雌激素受体结合，从而具有类雌激素和抗雌激素双重作用，这种推测得到了不少研究的证实。其中，有流行病学调查和人体研究显示大豆的摄入可以降低乳腺癌、围决经期骨质疏松和心血管疾病等的发病的危险。但部分研究也揭示，大豆异黄酮对人体的生物学效应存在较大的差异，研究者给出的解释是，因为多数大豆异黄酮在肠道需要经过代谢才能吸收，而人体对其代谢可能存在差异，其中人体产生equol(equol)或O-Desmethylangolensin(O-DMA)的能力受到特别关注。　　 本研究的第一部分将以广州20～69岁居民为对象，进行横断面调查，了解中国成年人在日常的饮食状态下、在负荷一定量大豆异黄酮3天后其尿equol和O-DMA的排出情况，并比较equol和O-DMA产出者和非产出者人体测量学指标以及血脂、血糖和血尿酸的差异。本研究的第二部分将以雌激素依赖的MCF-7细胞为研究靶点，以17-β雌二醇为对照，在体外研究大豆异黄酮不同成分对雌激素依赖性细胞MCF-7生长的影响，拟确定大豆异黄酮不同成分的雌激素活性及其活性的差异。同时，以雌性去势荷瘤裸鼠为研究对象，以17-β雌二醇为对照，研究大豆异黄酮不同成分对裸鼠荷瘤的影响，以期从细胞和整体两个层面揭示大豆异黄酮不同成分雌激素活性及其作用强度的差异。为探讨大豆异黄酮不同成分雌激素活性差异的机制，本课题还以17-β雌二醇为对照，研究和比较了大豆异黄酮不同的成分及代谢产物对通过ERα或者ERβ介导的基因转录活性的影响，以期揭示，大豆异黄酮不同的成分及代谢产物雌激素活性的作用通路。　　 内容与方法：　　 ⑴研究设计采用横断面研究方法，拟招募200名研究对象，年龄范围20-69岁，男女各半。采用食物频数问卷和三日膳食记录调查对象的膳食情况。分析比较对象进食日常饮食及负荷大豆异黄酮3天后24小时尿中大豆异黄酮及其代谢产物排出的差异。测定，对象空腹血脂、血尿酸和血糖的水平，拟分析其与大豆异黄酮及代谢产物排出之相关关系。　　 ⑵大豆异黄酮各成分对雌激素依赖性肿瘤细胞MCF-7体外生长的影响收集对数生长期的MCF-7细胞，在24孔细胞培养板内以2×104细胞/孔接种细胞，所用培养基为10％血清和1％抗生素的无品红DMEM，然后分别加入equol、daidzein、geinistein、glycitein和17β-雌二醇的DMSO溶液，前4种设计的剂量系列分别为0、0.001、0.01、0.1、1.0、10μM，17β-雌二醇为10-9M进行处理，试验重复3次，每次3个平行样。然后置于37℃、5％CO2培养箱中培养9天，培养基每两天换一次。采用细胞计数仪SYSMEX CDA-500进行细胞计数，以反映细胞的生长状况。　　 ⑶将MCF-7细胞在60mm细胞培养皿内以3×105细胞/培养皿接种细胞于培养基为10％血清和1％抗生素的无品红DMEM培养基4mL中，分别加入最终浓度为0、0.001、0.01、0.1、1.0和10μM的equol、daidzein、geinistein和glycitein。然后置于37℃、5％ CO2培养箱中培养4天。采用免疫印迹法测定ERα和ERβ蛋白质的表达。具体方法如下，通过10％SDS-PAGE将得到的细胞裂解产物分离，然后将蛋白质转移到PVDF膜上，用5％的脱脂奶粉封闭膜，加入1∶1000的一次抗体在4℃孵育过夜。洗膜后，用1∶2000的二次抗体在室温下孵育1小时。采用ECL检测系统检测ERα、ERβ和GAPDH。　　 ⑷Equol、Daidzein、Genistein或Glycitein对MCF-7细胞荧光素酶活性的影响将MCF-7细胞在60mm细胞培养皿内以3×105细胞/培养皿接种细胞于培养基为含10％血清无抗生素的无品红DMEM培养基中，培养一天后将1μg的PTK-ERE-luc和1μgβ-galaetosidase转染到细胞中。转染结束后，用含有equol、daidezin或Genistein0、0.001、0.01、0.1、1.0、10、100μM，Glycitein0.1、1.0、10、100μM，E210-9M，E210-9M分别加10μM的Equol、Daidzein、Genistein或Glycitein的培养基于37℃、5％CO2培养箱中培养三天，试验重复3次，每组3个平行样。采用荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性，将结果除以内参β-半乳糖苷酶的荧光素酶活性来标准化。　　 结果：　　 ①202名研究对象中，分别有101、94、199、198和198名研究对象24小时尿中能检测出equol、O-DMA、daidzein、genistein和glycitein，其含量以μmol计，equol为23.30±20.44、O-DMA为9.65±9.24、daidzein为48.96±33.21、genistein为4.98±3.38、glycitein为18.2±8.45，总量为100.28±67.24μmol。　　 ②MCF-7细胞系体外研究结果显示，10-9M雌二醇组MCF-7细胞数目显著多于对照组。而在本研究设计的大豆异黄酮各成分剂量范围(0.001μM～1μM)内，仅发现Equol和genistein在浓度为0.1μM时其MCF-7细胞数目显著多于对照组，显示出其促进激素依赖性乳癌细胞系MCF-7细胞的生长活性显著高于雌二醇，而Daidzein在1μM、Glycitein在10μM时，其MCF-7细胞数显著多于对照组，显示，与雌激素和大豆异黄酮的其他成分比较，Glycitein促进激素依赖性乳癌细胞系MCF-7细胞的生长活性需要更高的浓度。　　 ③与对照组相比较，10-9M的雌二醇使MCF-7细胞内的ERE转录活性增强了2.33倍。10μM Equol和daidzein使MCF-7细胞内的ERE转录活性分别增强了2.57倍和4.17倍。Genistein在浓度为1.0、10μM时均增强ERE启动子的活性并显示了剂量效应，在10μM时其转录活性为对照组的7.77倍。而glycitein在高浓度10μM和100μM时，MCF-7细胞内ERE的转录活性分别增加1.63倍和2.69倍。在10-9M的雌二醇存在的条件下，10μM的equol、daidezin、genistin和glycitein同样显著性的增强ERE转录活性，其活性分别为对照组的2.86倍、2.71倍、5.19倍和3.35倍。　　 结论：　　 ⑴在进食日常饮食时，广州居民尿中equol产出者的比例为14.4％，O-DMA产出者的比例为14.9％。负荷大豆异黄酮80mg/d连续3天后，广州居民尿中equol产生者的比例达到50％，O-DMA产生者的比例达到46.5％。　　 ⑵equol产生者中血尿酸水平显著低于equol非产生者；男性研究对象中，equol产生者腰臀比和甘油三酯水平显著低于equol非产生者。显示，大豆异黄酮健康效应可能与equol产生有关。　　 ⑶与daidzein和glycitein比较，equol和genistein在较低的浓度下显著促进体外培养雌激素依赖性肿瘤细胞MCF-7的生长。显示，equol和genistein有较高的雌激素活性。　　 ⑷1000mg/kg饲料的equol和genistein显著性的促进去势裸鼠体内雌激素依赖性肿瘤生长，其发挥作用的有效的日摄入量约为0.12mg/g/bw。　　 ⑸Equol、daidzein、genistein和glycitein能显著的增强MCF-7细胞内雌激素反应元件的转录活性，揭示，大豆异黄酮各成分可能通过雌激素受体β介导的途径发挥雌激素活性。