【摘 要】
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背景急性胰腺炎（Acute Pancreatitis,AP）发病率日益增加,是消化内科常见的急腹症,约20%的患者可快速发展为中度重症急性胰腺炎（Moderately severe acute pancreatitis,MSAP）和重症急性胰腺炎（Severe acute pancreatitis,SAP）,导致全身严重的炎症反应综合征（SIRS）,SAP病死率高达30%,但其发病机制尚未完全阐明
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背景急性胰腺炎（Acute Pancreatitis,AP）发病率日益增加,是消化内科常见的急腹症,约20%的患者可快速发展为中度重症急性胰腺炎（Moderately severe acute pancreatitis,MSAP）和重症急性胰腺炎（Severe acute pancreatitis,SAP）,导致全身严重的炎症反应综合征（SIRS）,SAP病死率高达30%,但其发病机制尚未完全阐明。大量研究表明血管屏障的破坏引起胰腺微循环障碍是AP的发病机制之一。血管内皮细胞的激活、内皮细胞损伤可能是AP微循环障碍血管屏障破坏的核心机制,既是微循环的始动因子,同时也是微循环的结果。研究表明AP的炎症过程中活化的内皮细胞表面首先出现P-选择素,随后出现E-选择素。SAP动物研究发现大鼠肺组织中血清ICAM-1水平明显升高,白细胞表面L选择素分子上的sLeA与内皮细胞表面的P选择素及E选择素之间的相互识别和结合,促进炎症的发生。研究发现在AP发生发展过程中,患者血清中的CAM水平可以间接反映AP患者微循环紊乱和障碍程度,也是早期诊断和预测SAP的重要指标。AP过程中ICAM-1对血管内皮细胞的表达增加,可直接损伤内皮细胞,使血管通透性增加,导致胰腺微循环障碍。此外,对于高脂性急性胰腺炎三酰甘油代谢产物游离脂肪酸（FFA）刺激炎症介质合成,释放细胞内钙,抑制线粒体功能,损伤胰腺血管内皮细胞和腺泡细胞,导致胰腺毛细血管阻塞,诱发胰腺微循环障碍,最终导致胰腺炎发生和胰腺坏死。研究表明AP中TNF-α增加,通过抑制SAP大鼠TNF-α的表达,可减少其与相应受体结合,阻断凋亡信号向细胞内部传递,最终抑制细胞凋亡的执行者cacpase蛋白酶家族的活化,阻止SAP大鼠主动脉内皮损伤及内皮细胞的凋亡。因此,血管内皮细胞功能改变在AP发病过程中具有重要作用。研究表明血管内皮损伤时会释放一种微颗粒,即内皮细胞微粒（Endothelial microparticle,EMPs）,可间接作为内皮损伤的标志物近年来被广泛研究,参与炎症反应及各种病理生理过程。本研究通过检测AP患者中EMPs水平的变化以及人脐静脉内皮细胞（HUVEC）刺激后的功能改变,探讨EMPs在AP患者发病机制中的影响和可能机制,旨在为AP的发病机制研究提供依据。目的探讨急性胰腺炎（AP）患者血浆内皮细胞微粒（EMPs）水平的改变并观察内皮细胞微粒的初步形成机制。方法收集安徽医科大学第一附属医院2020年8月-2021年6月60例AP患者的临床血液标本,分为轻症急性胰腺炎（MAP）组23例、中度重症急性胰腺炎（MSAP）组23例和重症急性胰腺炎（SAP）组14例,并同时选取同时期的健康体检者20例作为对照组。使用差速离心法分离获得贫血小板血浆,采用流式细胞仪检测CD31+CD41-EMPs水平,ELISA法检测AP患者血浆中内皮素（ET-1）、血管性血友病因子（vWF）、一氧化氮（NO）和血管内皮细胞黏附分子-1（VCAM-1）的水平。制备HUVEC Transwell模型并用AP患者的血浆刺激,采用流式细胞仪检测细胞培养液中CD31+CD41-EMPs水平,采用qRT-PCR方法检测内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、VCAM-1、NADPH氧化酶及P-selectin的mRNA表达水平,采用DCFH-DA荧光法检测HUVEC中活性氧（ROS）的含量,JC-1染色法检测HUVEC线粒体膜电位的变化。结果与对照组比较[188.09±17.20个/μl],MAP、MSAP、SAP组EMPs水平明显升高[369.41±156.78个/μl、997.29±186.24个/μl、1769.00±274.62个/μl,F值为283.105,P＜0.01],与MAP、MSAP组相比,SAP组EMPs水平升高更明显（P值均＜0.01）。AP患者EMPs水平与APACHEⅡ、BISAP、Marshall评分、Ranson、CT评分和CRP评分均呈正相关（相关系数r值分别为0.6862、0.7773、0.8533、0.7138、0.7718、0.4739,P值均＜0.01）。AP患者血浆刺激HUVEC后6h,与对照组相比,细胞培养液中的EMPs水平明显升高,HUVEC中eNOS、iNOS、ICAM-1、VCAM-1、NADPH氧化酶及P-selectin的mRNA表达水平均增加,同时AP患者组HUVEC内ROS水平、线粒体膜电位下降程度显著升高,差异有统计学意义。结论AP患者血浆EMPs水平明显升高,与胰腺炎严重程度相关,同时体外AP患者血浆可以刺激HUVEC的EMPs形成明显增加,机制可能与细胞氧化损伤相关。
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