【摘 要】
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目的分析感染高危型人乳头瘤病毒（High Risk Human Papilloma Virus,HR-HPV）及宫颈上皮内瘤变（CIN）女性的阴道微生态状况,探讨HR-HPV及CIN与阴道微生态的关系。方法2018年3月至2019年9月收集到我院妇科门诊体检,HR-HPV筛查阳性转入我院阴道镜门诊检查,经病理活检确诊为CIN的受试者146例作为实验组;以同时期筛查无HPV感染且宫颈液基细胞学（LC
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目的分析感染高危型人乳头瘤病毒（High Risk Human Papilloma Virus,HR-HPV）及宫颈上皮内瘤变（CIN）女性的阴道微生态状况,探讨HR-HPV及CIN与阴道微生态的关系。方法2018年3月至2019年9月收集到我院妇科门诊体检,HR-HPV筛查阳性转入我院阴道镜门诊检查,经病理活检确诊为CIN的受试者146例作为实验组;以同时期筛查无HPV感染且宫颈液基细胞学（LCT）无异常者139例作为对照组。收集所有受试者一般临床资料和相关危险因素信息,并进行详细的妇科检查及阴道微生态检测。用快速革兰氏染色法分别对乳酸杆菌、滴虫、淋球菌和外阴阴道假丝酵母菌（Vulvovaginal Candidiasis,VVC）等进行检测;细菌性阴道病（Bacterial Vaginosis,BV）采用Nugent评分作为诊断标准;用精密p H试纸测定阴道微环境p H值;选用阴道微生态检测试剂盒对过氧化氢（H2O2）、白细胞酯酶、唾液酸苷酶进行测试;微生物检验法对支原体进行检测;选用沙眼衣原体检测试剂盒采用双抗体夹心法对沙眼衣原体进行检测。随机选取实验组与对照组各35例样本进行二代测序,提取所有细菌DNA,用恒定区序列设计引物扩增16SrDNAV4高变异序列区域。利用Illumina-Misq高通量测序平台对扩增产物进行测序,优化数据,用99%的相似性阈值划分分类操作单元（OTU）,比较数据库分析生物信息,确定两组间的物种差异。结果实验组检出滴虫性阴道炎（Trichomonal Vaginitis,TV）3例、BV 58例、VVC12例、解脲支原体（Ureaplasma Urealyticum,UU）41例、人型支原体（Mycoplasma Hominis,MH）32例、衣原体（Chlamydia Trachomatis,CT）45例、乳酸杆菌阴性42例;对照组检出TV 5例、BV 13例、VVC 7例、UU 10例、MH 9例、衣原体7例、乳酸杆菌阴性5例。其中48例为TV、VVC、BV、UU、MH、CT中的两种或两种以上混合感染。实验组中BV、MH、UU、CT和乳酸杆菌阴性检出率较对照组显著增加（P0.05）。两组p H值与H2O2异常率差异有显著意义（P0.05）。Illumina测序对阴道微生物16SrDNA基因V4高变区进行序列测定,门水平上对照组厚壁菌门（Firmicutes）占比最高61.38%,其余20个菌门合计占38.62%;实验组厚壁菌门占比明显减少46.15%,而放线菌门（Actinobacteria）、变形菌门（Proteobacteria）、梭杆菌门（Fusobacteria）、拟杆菌门（Bacteroidetes）丰度增加并发现了布鲁氏菌属。属水平上对照组乳酸杆菌属占82.45%;实验组中乳酸杆菌属降低至40.84%,而加德纳菌属则由4.01%增加至18.87%。多因素Logistic回归分析显示BV、CT、UU、乳酸杆菌阴性及p H异常是CIN的独立危险因素（P<0.05）。结论1、BV、CT、UU、MH、乳酸杆菌阴性及p H值异常与CIN有相关性。而TV、VVC的感染与CIN没有显著关联。2、CIN与p H、H2O2异常呈正相关,与阴道清洁度、唾液酸苷酶和白细胞酯酶的异常没有显著关联。3、16S rDNA测序结果表明,HR-HPV感染妇女的阴道菌群多样性增加,门水平上厚壁菌门明显减少,并发现有布鲁氏菌属存在;属水平上乳酸杆菌属相对丰度明显下降,加德纳菌则增加与HR-HPV感染和CIN呈正相关。4、BV、乳酸杆菌阴性、CT、UU及p H值异常是CIN的独立危险因素;MH与H2O2异常虽与CIN有关但并非其独立危险因素。
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