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目的：构建携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的复制缺陷型腺病毒载体。方法：在GenBank检索人CD80、CD40L及IL-12b基因编码序列，确定扩增区域，设计引物。以Trizol抽提人外周血单个核细胞总RNA，使用RT-PCR方法获得IL-12b信号肽、sCD80、sCD40L等基因的编码序列，并分别克隆入T载体。重叠PCR构建sCD80-Linker-sCD40L融合基因，克隆入T载体。使用Stratagene公司AdEasy XL Adenoviral Vector System试剂盒构建携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的复制缺陷型腺病毒载体。空斑实验检测病毒滴度，Westen blot测定蛋白表达。结果：经测序证实，正确克隆了人IL-12b信号肽、sCD80、sCD40L编码序列，构建了携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的T载体，并进一步构建了携带该融合基因的复制缺陷型腺病毒载体。本实验病毒滴度为2×1010cfu／ml。Westen blot表明该融合蛋白被正常表达。结论：成功构建了携带sCD80-Linker-sCD40L融合基因的复制缺陷型腺病毒载体，可以进一步进行体内和体外转染实验。