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特应性皮炎（Atopic Dermatitis,AD）是一种以瘙痒为特征且反复发作的炎症性皮肤病,与金黄色葡萄球菌的定殖及皮肤微生物多样性下降高度相关。金黄色葡萄球菌具有加重AD的作用,因此被认为是一个合理的治疗靶点。鉴于目前广谱抗生素疗法效果不佳,且产生细菌耐药性等问题,利用微生物种间竞争抑制金黄色葡萄球菌将成为一种有效的微生物疗法。本研究对人体皮肤微生物进行了分离、培养与鉴定;研究了不同的皮肤微生物对金黄色葡萄球菌的拮抗效果,筛选出拮抗作用强的代表性菌株;对代表性菌株全基因组进行测序;应用代表性菌株于小鼠皮肤改善了AD小鼠皮肤炎症。通过上述研究获得了如下结果:1.皮肤微生物的培养组。使用一次性拭子在人体的不同皮肤部位进行取样。经过简单培养,单菌落的分离,划线纯化与形态学和16s r RNA分子生物学鉴定,共获到了上万个单菌落,挑选了具有代表性的86个菌株,菌株提取DNA后扩增直接测序和BLAST。经比对鉴定,分别隶属6个细菌属,20个种。6个属分别为葡萄球菌属、假单胞菌属、芽孢杆菌属、克雷伯氏菌属、短杆菌属和微球菌属。2.皮肤微生物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用。利用皮肤微生物无细胞上清液与Staphylococcus aureus USA300共培养,在21%与1%两个氧气水平下研究皮肤微生物对金黄色葡萄球菌细胞生长和生物膜形成的抑制作用。结果发现21%氧水平下生长抑菌率大于30%的菌株共有11株,主要是Bacillus subtilis和Staphylococcus epidermidis。Bacillus subtilis TOS-89对金黄色葡萄球菌细胞生长抑制率最高,达到75%;1%氧水平下生长抑菌率大于30%的菌株共有9株,主要是Bacillus subtilis、Staphylococcus epidermidis和Staphylococcus aureus。Bacillus subtilis TOS-89对金黄色葡萄球菌细胞生长抑制率最高,达到39%。皮肤微生物无细胞上清液对Staphylococcus aureus USA300生物膜形成的抑制作用中,芽孢杆菌和葡萄球菌菌株抑制效果相对较好,最高抑菌率分别达到64%和53%。采用抑菌圈法探究皮肤微生物与金黄色葡萄球菌的直接互作,结果发现共有12株菌株对Staphylococcus aureus USA300具有显著的抑制作用,其中Bacillus subtilis TOS-90的抑菌圈最大,为1.22±0.08cm;Brevibacterium sp.37 TOS-91的R值（抑菌圈直径/菌落直径）最大,达到3.22±0.69。根据上述实验结果与相关研究文献,选取了三株代表性拮抗菌株用于后续的Staphylococcus aureus USA300拮抗研究,其分别为Staphylococcus warneri TOS-23、Staphylococcus epidermidis GS-68与Bacillus subtilis TOS-90。3.皮肤微生物对小鼠特应性皮炎的改善作用。利用DNFB溶液与Staphylococcus aureus USA300构建AD小鼠模型,在小鼠皮肤上涂抹拮抗菌菌悬液进行干预治疗。治疗组共设有四组,分别为正常组（CT）、模型组（AD）、Bacillus subtilis TOS-90治疗组（BS）、Staphylococcus epidermidis GS-68治疗组（SE）、Staphylococcus warneri TOS-23治疗组（SW）与混合菌治疗组（M）。结果显示,BS组的治疗效果相对较好,其小鼠皮炎评分SCORAD、耳厚与Staphylococcus aureus USA300定殖均显著下降（P＜0.001）。组织学HE染色显示BS组较AD组小鼠表皮损伤减轻。16S r RNA对小鼠皮肤微生物组测序表明,BS组较AD组的皮肤菌群多样性与丰富度均有提高（P＜0.05）。AD与BS组间差异物种Lefse分析表明,AD组中优势菌为葡萄球菌属Staphylococcus,BS组中优势菌主要为棒状杆菌属Corynebacterium、普雷沃氏菌属Prevotella与拟杆菌属Bacteroides。结果表明,治疗组通过对Staphylococcus aureus USA300的抑制和提高小鼠皮肤微生物多样性改善了小鼠特应性皮炎皮肤炎症。4.Bacillus subtilis TOS-90的全基因组测序。测序结果显示Bacillus subtilis TOS-90的基因组总长度为4.69Mb,GC含量为45.94%,预测到5870个编码基因。根据COG功能注释结果,3502个基因具有明确的蛋白功能分类。根据KEGG功能注释结果,Bacillus subtilis TOS-90具有链霉素、铁载体群非核糖体肽、新生霉素、万古霉素、头孢菌素、新霉素、卡那霉素和庆大霉素的生物合成基因。根据CAZy结果,共注释到碳水化合物活性酶57个。使用Signal P预测到信号肽蛋白422个,信号蛋白比例为7.19%。使用anti SMASH数据库预测次级代谢产物基因簇,共发现18个次级代谢产物基因簇,其中10种与抗生素合成相关。综上所述,本研究将人体皮肤共生菌应用于小鼠特应性皮炎,有效的改善了小鼠特应性皮炎皮肤症状,为微生物疗法用于特应性皮炎提供了理论依据。