NF-κB的受体活化因子配体/受体(RANKL/RANK)信号介导破骨细胞形成和骨吸收。此外,此信号还可以影响其他生物学过程,包括免疫系统和癌症。RANKL/RANK信号在淋巴结发育、淋巴细胞分化、树突状细胞存活、T细胞活化和免疫耐受诱导中均扮演着重要角色。因此,抑制RANKL为阻止骨疾病、癌症病人的骨转移、骨免疫相关疾病、打破中枢免疫耐受促进抗肿瘤免疫应答T细胞的发生等提供一个新的思路与治疗手段。本研究首先对人RANK胞外段序列进行毕赤酵母表达系统的密码子优化,然后克隆到pPIC9K酵母表达载体中,将重组质粒电转化到毕赤酵母,筛选获得高表达RANK胞外段蛋白(RANK-N)的菌株。我们通过SDS-PAGE、考马斯亮蓝染色和Western Blot鉴定,证实所构建表达菌株及目的蛋白的正确性。经过摇瓶表达的超滤、Sephadex G-50凝胶过滤层析和Q Sepharose FF离子交换层析三个步骤纯化重组蛋白,获得了纯度在95%以上的目的蛋白。利用等离子共振(SPR)技术分析重组RANK蛋白与RANKL蛋白之间的亲和力,进而证实了重组RANK-N能结合RANKL。通过一系列体外体内实验发现重组RANK-N蛋白能够阻断RANKL激活的RANK信号。此外,我们利用人结直肠癌小鼠移植瘤模型(patient derived xenograft,PDX)发现RANK胞外段蛋白可以抑制人结肠癌的生长。通过此项研究,我们建立了一个简单有效、可线性放大的RANK-N表达纯化系统,为最终的大规模生产及成果转化奠定了基础。