NCOA2是类固醇受体辅激活因子家族成员之一,作为一种PPARr辅激活因子,在脂类代谢及能量平衡中发挥着重要的作用。对NCOA2基因表达调控的组织差异性进行研究,有助于深入了解猪不同部位脂肪沉积机理,为猪的选育提供理论依据和技术支持。1、猪NCOA2基因上游调控区序列分析及核心启动子区的验证本试验首先通过生物信息学分析获得猪NCOA2基因上游调控区序列,并预测分析了该区域内的转录因子结合位点,预测了CdxA、TATA、SRY、Nkx-2、GATA-X、 Sox-5、AML-la、MZF1等多种转录调控元件和结合位点。通过构建上游调控序列系列缺失表达载体,利用双荧光报告系统确定了NCOA2基因的核心启动子区,结果表明,NCOA2基因核心启动子区位于-483～+9。2、猪NCOA2基因核心启动子区甲基化分析DNA甲基化作为脊椎动物DNA唯一的自然化学修饰方式,对基因表达的调控发挥着重要的作用。而基因启动子区尤其是核心启动子区内的CpG甲基化与转录的负调控有着密切的关系。本试验基于猪皮下脂肪组织、肾周脂肪组织和肌内脂肪组织中NCOA2基因表达水平的差异,采用BSP甲基化检测技术对不同组织之间NCOA2基因核心启动子区序列进行了甲基化检测。结果如下：利用亚硫酸氢盐测序(BSP)这一甲基化检测法检测了猪NCOA2基因核心启动子区目的片段,甲基化分析发现,皮下脂肪组织、肾周脂肪组织及肌肉脂肪组织中的25个CpG位点纽织间元差异,均未发生甲基化,说明NCOA2基因在皮下脂肪组织、肾周脂肪组织及肌内脂肪组织之间的表达差异是与其核心启动子区甲基化水平不相关的,即并不是由于组织间的甲基化水平的差异引起的组织间表达水平的差异。3、猪种间NCOA2启动子区变异分析二花脸猪作为一个地方猪种,具有肌内脂肪含量较高的特点,本试验针对二花脸猪与外种三元商品猪之间肌内脂肪含量的差异,分析了NCOA2基因的表达水平,进一步研究了两个猪种间NCOA2基因启动子区序列的差异。结果如下：二花脸猪的肌内脂肪含量显著高于外种三元商品猪(杜洛克×长白猪×约克夏),二花脸猪的NC删2基因的表达水平也显著高于外种三元商品猪。NC洌2基因核心启动子区中-224处,二花脸猪的碱基为C,而外种三元商品猪是T,存在种间差异。