目的:建立实验动物(Lewis大鼠)下肢缺血模型,提取、分离纯化骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs),BrdU标记后大鼠患肢局部注射,明确移植干细胞在生物体内的真实转归,探讨干细胞治疗动脉缺血性疾病的确切机理。方法:采用手术缝扎、切除实验动物(大鼠)股动脉及其分支,结合内膜损伤、局部血栓形成等因素,对实验动物(大鼠)下肢缺血模型的制作,采用激光多普勒血流、血压分析、组织学检测、Ⅷ因子免疫组化及下肢血管造影等方法证实;用密度梯度离心结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSCs,传代扩增,测定生长曲线,通过形态学观察,细胞化学及免疫细胞化学法分析大鼠骨髓MSCs的表型和功能特点,并BrdU标记。将BrdU标记的大鼠间充质干细胞进行患肢移植,对侧行盐水注射。结果:血管造影等检查显示术后实验动物(大鼠)下肢的细微侧支血管记数增加、血压显著下降、血流显著下降,下肢肌肉的组织学研究显示有萎缩、纤维化、坏死和炎性细胞浸润。贴壁培养法是一种简便易行的MSCs培养方法,操作简单、成功率高,可作为培养大鼠MSCs的常规方法。植入缺血区的MSCs部分形成血管样结构,移植组血管数量增多,下肢缺血状态改善。结论:间充质干细胞(MSCs)主要存在于骨髓中,是多潜能干细胞,在脐血、外周血、脂肪、皮肤等多种组织中也相继分离出。具有独特的免疫特性,在异种异体环境内长期存在,使其临床应用前景更为广泛。目前,MSCs的分离培养、诱导分化及鉴定体系已趋成熟,理论上可分化为所有中胚层来源的细胞,血管内皮细胞来源于中胚层,因此具有分化为血管内皮细胞的可能性。MSCs移植缺血下肢后,可明显改善下肢血供,促进侧枝循环建立。