白纹伊蚊对登革病毒细胞内免疫的研究

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登革热是由登革病毒引起,经媒介伊蚊传播,在世界上流行最广泛的一种虫媒病毒性疾病。控制媒介伊蚊是防治DF最有效的方法,但传统上控制登革热媒介的措施存在许多局限性,转基因技术的出现为蚊媒疾病的防治提供了一个新的思路。本研究扩增和克隆登革病毒C基因和prM基因,构建了昆虫表达载体pBhspEGFP,将prM基因以3种不同表达形式重组入昆虫表达载体,Western Blot和荧光显微镜观察证明在白纹伊蚊C6/36细胞中成功表达了prM-EGFP融合蛋白。转染重组质粒后C6/36细胞表现出对登革病毒入侵的抵抗性,从而复制出C6/36细胞对登革病毒的细胞内免疫现象。发现无论是否表达prM蛋白,只要有prM基因转录可引起细胞内免疫现象;prM基因正义和反义转录形式均可诱导细胞内免疫;并探讨其形成机制可能是通过RNA干扰作用而产生。构建了以转座子piggyBac因子为基础的转基因载体pB[PUBnls EGFP-prM],PCR和Southern Blot证明构建的转基因载体可以将EGFP-prM基因整合入在蚊虫基因组中。验证了转座子piggyBac因子、启动子polyubiquitin可以在白纹伊蚊中发挥作用,为进一步构建不传播登革病毒的转基因白纹伊蚊奠定了基础。
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