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背景: 卵巢癌(Ovarian cancer)是妇科第三位常见肿瘤,但由于其发病隐匿,进展迅速,肿瘤易播散导致盆腹腔脏器广泛转移,超过半数的卵巢癌患者诊断时已为晚期,预后极差.目前根治性手术联合辅助性化疗仍是其基本治疗方案,但治疗效果不甚理想,约70%的患者在两年内复发,5年存活率不超过40%.卵巢癌是一种免疫性肿瘤,免疫治疗及分子靶向治疗有望成为其治疗新方向.但肿瘤微环境中浸润的免疫抑制细胞和免疫抑制分子可诱导肿瘤局部免疫抑制,促进肿瘤免疫逃逸,是免疫治疗的重大障碍. 人γδT细胞是一类分布于外周血和黏膜组织的非MHC限制性T淋巴细胞,是天然免疫的第一道防线.根据其TCR受体δ链的异质性分为Vδ1γδT(Vδ1T)和Vδ2γδT(Vδ2T)两种主要细胞亚群.Vδ2T细胞富集于外周血中,能在体外杀伤多种肿瘤细胞.Vδ1T细胞则主要分布于肠道、皮肤、肝脏等部位,在外周血中仅占很小比例,主要参与维持组织上皮完整性.近年研究发现γδT细胞参与肿瘤免疫既可发挥细胞毒效应杀伤肿瘤细胞,又能成为肿瘤细胞的帮凶,介导肿瘤免疫逃逸. 本课题探讨γδT细胞在卵巢癌微环境中的特征及功能,主要从以下几个方面进行探讨:(1)卵巢癌患者外周血、肿瘤组织中γδT细胞及其主要亚群Vδ1T、Vδ2T细胞的比例,及其胞内因子IFN-γ、IL-17A的表达水平;(2)卵巢癌组织中γδT细胞、Vδ1T细胞的分布及数量;(3)卵巢癌中γδT细胞的功能.研究结果将有助于了解卵巢癌微环境中γδT细胞的分布特征及免疫功能,为卵巢癌免疫治疗提供新的方向. 方法: 流式细胞术检测15例卵巢癌患者、14例卵巢良性肿瘤患者和20例健康体检者外周血中γδT细胞及其主要亚群Vδ1T、Vδ2T细胞的比例,同时检测γδT细胞中IFN-γ、IL-17A的表达水平;流式细胞术检测15例卵巢癌组织、10例卵巢良性肿瘤组织和4例卵巢正常组织中γδT细胞及Vδ1T、Vδ2T细胞亚群的比例,和胞内因子IFN-γ、IL-17A的水平;免疫组织化学法检测40例卵巢癌组织、20例卵巢交界性肿瘤组织和20例卵巢良性肿瘤组织中γδT、Vδ1T细胞的数量;收集卵巢良性肿瘤组织上清、卵巢癌组织上清,并分选卵巢癌组织来源和健康人外周血来源γδT细胞,建立γδT细胞与良恶性肿瘤组织培养上清体外共培养体系,实验分组如下:卵巢癌来源γδT细胞/外周血来源γδT细胞与RPMI-1640Medium组,卵巢癌来源γδT细胞/外周血来源γδT细胞与卵巢良性肿瘤组织上清组,卵巢癌来源γδT细胞/外周血来源γδT细胞与卵巢癌组织上清组,共培养150min后计算各组趋化指数;同上分选不同来源γδT细胞作为效应细胞,与靶细胞SK-OV3以效靶比10:1比例共培养4h,以CFSE示踪肿瘤细胞SK-OV3,7-AAD标记死亡细胞,应用流式细胞术分别检测不同来源γδT细胞的杀伤功能. 结果: 卵巢癌患者外周血中γδT细胞及其主要亚群Vδ1T、Vδ2T细胞比例与卵巢良性肿瘤患者组、健康体检组差异无统计学意义(P>0.05);卵巢癌患者外周血γδT细胞表达IL-17A水平显著高于卵巢良性肿瘤患者(P<0.01)和健康体检者(P<0.01),而卵巢癌患者外周血γδT细胞表达IFN-γ水平显著低于卵巢良性肿瘤患者(P<0.05)和健康体检者(P<0.0001);卵巢癌组织γδT细胞的比例显著高于卵巢良性肿瘤组织(P<0.01)和卵巢正常组织(P<0.01);相比卵巢良性肿瘤组织和正常卵巢组织,卵巢癌组织中Vδ1T细胞浸润比例显著增高,差异具有统计学意义(P<0.05;P<0.01);卵巢良性肿瘤组织与卵巢正常组织中Vδ1T细胞比例无明显差异(P>0.05);Vδ2T细胞在卵巢良性肿瘤组织浸润比例高于卵巢癌组织(P<0.01),而Vδ2T细胞浸润比例在卵巢正常组织和卵巢癌组织中无显著差异(P>0.05);流式细胞术显示卵巢癌组织中γδT细胞表达IFN-γ水平显著低于卵巢良性肿瘤组织(P<0.01),而IL-17A表达水平显著增高(P<0.001);卵巢癌组织中γδT细胞IL-17A表达水平与患者临床分期、肿瘤大小和血清CA125浓度相关(P<0.05;P<0.05;P<0.01). 免疫组化结果显示卵巢癌组织中γδT细胞数量显著高于卵巢交界性肿瘤组织(P<0.01)和卵巢良性肿瘤组织(P<0.01);Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌组织中γδT细胞数量显著高于Ⅰ/Ⅱ期(P<0.05);肿瘤体积≥5cm、有淋巴结转移的卵巢癌中γδT细胞的数量高于肿瘤体积<5cm、无淋巴结转移卵巢癌(P<0.05);相比卵巢交界性肿瘤组织(P<0.05)和卵巢良性肿瘤组织(P<0.01),卵巢癌组织中Vδ1T细胞数量显著增高;且Ⅲ/Ⅳ期、有淋巴结转移卵巢癌组织中Vδ1T细胞数量明显高于Ⅰ/Ⅱ期、无淋巴结转移卵巢癌(P<0.05). 体外共培养试验结果显示,与RPMI-1640Medium组相比,卵巢癌组织上清和卵巢良性肿瘤组织上清均能招募卵巢癌组织来源γδT细胞和健康人外周血γδT细胞到下室(P<0.05;P<0.05),但卵巢癌组织上清招募能力强于卵巢良性肿瘤组织上清(P<0.05);细胞毒作用实验显示,在同样的效应细胞/靶细胞比例下(10:1),健康人外周血来源的γδT细胞杀伤SK-OV3细胞能力显著强于卵巢癌组织来源的γδT细胞(P<0.05). 结论: 卵巢癌中γδT细胞及其主要亚群Vδ1T细胞所占比例显著增高,且与卵巢癌患者临床病理特征相关;卵巢癌组织上清能趋化更多的γδT细胞;同时卵巢癌中γδT细胞细胞毒杀伤功能被抑制;研究结果提示卵巢癌微环境中的γδT细胞,尤其是Vδ1T细胞亚群在卵巢癌微环境中发挥重要作用,为卵巢癌免疫治疗提供了新方向.