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目的：DNA聚合酶β在DNA的损伤修复中起重要作用，主要参与DNA碱基切除修复，一般不参与DNA的复制。有研究表明正常细胞中的DNA聚合酶β在整个细胞周期中都是低表达的，高表达的DNA聚合酶β可能在DNA合成中与其它DNA聚合酶竞争而参与DNA的复制。而DNA聚合酶β是真核生物DNA聚合酶中复制保真性最差的酶，它过多的参与DNA复制会引起基因组的不稳定性，导致肿瘤发生。各种肿瘤组织中DNA聚合酶β表达增高已有很多报道。我们曾对人食管癌组织的DNA聚合酶β进行研究，发现癌及癌旁组织中DNA聚合酶β的表达明显高于正常组织，提示DNA聚合酶β的表达改变可能是食管癌癌变的早期事件。但在恶性细胞的逆转化过程中DNA聚合酶β是如何变动的，尚未见报道。本实验以8-溴-cAMP及槲皮素作为分化诱导剂处理人食管癌Eca-109细胞，以PCNA、VEGF、EGFR、c-myc等基因表达作为恶性生物标志观察人食管癌Eca-109细胞的诱导分化效应，探讨DNA聚合酶β以及与其共同在碱基切除修复中起作用的XRCC1(X-射线修复交联-补充蛋白)、wtp53等基因在细胞逆转化过程中的改变及其意义。 材料和方法：人食管癌Eca-109细胞由郑州大学医学院分子细胞生物研究中心提供，含野生型DNA聚合酶β(wtpolβ)cDNA的pcDNA.3质粒由病理生理实验室构建提供，经双酶切获得wtpolβcDNA：野生型p53 (wtp53)cDNA、c-myc cDNA、EGFR cDNA(8.5kb)均购于北京大学分子生物学研究中心。贴壁培养人食管癌Eca-109细胞，传代后分成三组：(1)加8-溴-cAMP(Br)组；(2)加槲皮素(Q)组；(3)不加任何药物对照(C)组；同时培养48h后收集细胞，分别制成细胞滴片，硝酸纤维素膜点和提取总RNA。将polβcDNA，EGFR cDNA分别用郑州大学2003硕士生毕业论文分化诱导剂Eca一109细胞的DNA聚合酶日及其相关基因表达影响随机引物法制成生物素标记的cDNA探针;wtp53cDNA及c一myc cDNA探针由郑州大学医学院分子细胞生物研究中心提供。进行3组细胞的原位杂交和RNA斑点印迹阵列。另进行DNA聚合酶p，XRCCI，VEGF及PCNA的免疫组化染色及免疫斑点印迹阵列。印迹阵列皆用岛津薄层色谱扫描仪(T LC)进行波长523nln的扫描数值比较。结果:1.观察生物素标记的探针杂交信号:polp的杂交信号呈兰紫色细颗粒，定位于胞质。两实验组细胞(Br组及Q组)杂交信号弱于对照组，两实验组杂交信号分别与对照组相比差异有统计学意义(只0.05)。诚p53的杂交信号呈兰紫色细颗粒分布于胞质，两实验组细胞杂交信号明显强于对照组，分别与对照组相比差异有统计学意义(只0.05)。2.RNA斑点印迹显示:与对照组相比:Br组的DNAPolp，EGFR及c一myc的RNA斑点的TLC扫描数值分别下调了5倍，6.5倍，2.5倍，而讯p53基因表达则上调了2.5倍;Q组的DNAPolp，EGFR及e一mye的RNA斑点TLe扫描数值分别比对照组下调了6.5倍，7倍，2.2倍，而诚p53的RNA斑点的TLC扫描数值则比对照组上调了2.2倍。3.免疫组化染色观察:DNAPolp一工R、XRCcl一IR皆呈棕黄色颗粒，主要定位于细胞核，两实验组细胞(Br组及Q组)免疫反应弱于对照组，两实验组免疫反应分别与对照组相比差异有统计学意义(只0.05)。两实验组之间差异无统计学意义 (乃0 .05)。4.免疫斑点印迹显示:Br组DNA聚合酶p一IR，XRCCI一IR，PCNA一IR及VEGF一IR的TLc扫描数值分别比对照组低4.5倍，4.5倍，5倍和4.5倍;Q组DNA聚合酶p一IR，XRCCI一IR，PCNA一xR及VEGF一IR的TLC扫描数值分别比对照组低4.0倍，4.5倍，5.5倍和3.5倍。 结论: 1.8一澳一cAMP及棚皮素可下调作为肿瘤细胞恶性程度生物学指标的PCNA、VEGF、 EGFR、c一myc等的表达，上调佩p53的表达，表明对人食管癌Eca一109细胞具有一 定的诱导分化效应。 2.在人食管癌Eca- 109细胞逆转化后，其DNA聚合酶p及XRCCI的表达下调，提郑州大学2003硕士生毕业论文分化诱导剂Eca一109细胞的DNA聚合酶日及其相关基因表达影响 示人食管癌Eca一109细胞的DNA聚合酶p和XRCCI是高表达的。3.DNA聚合酶p及XRCCI的表达与Eca一109细胞分化有关。4.高表达DNA聚合酶p可导致恶性变表型，诱导剂可下调DNA聚合酶p基因表达 提示它具有对肿瘤治疗的应用意义。