帕金森病是中枢神经系统常见的退行性疾病，其发病率仅次于阿尔茨海默病，位于第二位。本病基本上属于中、老年人的疾患，随着我国人口平均寿命延长和社会老龄化进程加速，帕金森病的发病率呈明显上升势头，这不仅严重危害中老年人的健康，同时给国家、社会和家庭带来巨大的经济和生活负担，已经成为一严重的社会问题。帕金森病的发病原因和致病机制至今还不完全清楚，其主要的病理生化学改变是位于中脑黑质致密区的多巴胺能神经元渐进性变性死亡，致使黑质一纹状体通路多巴胺神经递质水平下降，引起锥体外系的功能失调，从而导致以随意运动减慢，肌张力僵直，肢体震颤和正常的姿势平衡反射丧失为主的临床症状。 长期以来，人们一直在寻找能够有效治疗帕金森病的方法，由于本病主要是源于多巴胺能神经元变性死亡而致，若能将合成和分泌多巴胺的细胞移植入黑质一纹状体系统，理论上讲是最为理想的治疗措施，可以起到治愈疾病的作用。因此，从人胚胎中脑组织获得细胞悬液进行移植的细胞替代疗法得以在临床上推广应用。但是这种疗法却存在难以克服的困难，主要限制因素是无法同时获得足够用于移植的胚胎组织，所以，寻找新的细胞来源成为细胞替代治疗首要解决的问题。骨骼肌组织来源的干细胞作为一种成体干细胞，易于进行体外分离和扩增，同时可用于自体移植，避免了免疫排斥反应。近年来其多向分化的潜能也相继被报导。本研究，将探索成年大鼠骨骼肌组织来源的干细胞向多巴胺能神经元分化的潜能，旨在为临床自体移植治疗帕金森病奠定理论和实验基础。 材料与方法: 1、成年大鼠骨骼肌组织来源的干细胞分离、培养和鉴定取正常成年SD大鼠腓肠肌组织，分离后的细胞培养于适合肌肉干细胞增殖的F10培养基中，应用连续贴壁的方法去除成纤维细胞和其他混杂细胞。进行体外培养扩增，适时传代，反复冻融纯化。应用免疫细胞化学、western杂交、Real-Time PCR方法对其进行鉴定，明确分离获得的干细胞类型；应用流式细胞术检测细胞表面抗原的表达，并与造血、间充质和神经干细胞加以区分。 2、定向诱导骨骼肌来源的干细胞向神经外胚层的转化将骨骼肌组织来源的干细胞培养于神经干细胞优势培养基中8-10天。应用免疫细胞化学、western杂交、Real-Time PCR方法进行细胞转化的鉴定，包括成肌标志蛋白、神经干细胞标志蛋白以及早期和成熟神经元标志蛋白的变化情况。对多巴胺合成限速酶-酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况也进行了鉴定。 3、骨骼肌干细胞转化而来的神经干细胞向多巴胺能神经元的分化应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、Shh和FGF-8b进行预诱导6天，然后撤除改换为抗坏血酸、forskolin和胶质细胞源性神经营养因子诱导7-14天。应用免疫细胞化学、westem杂交、Real-Time PCR方法对早期和成熟神经元标志蛋白进行鉴定；对多巴胺能神经元发育相关标志物(TH、DAT、Nurrl、Enl、En2、Lmxlb、Pitx3)的表达情况进行鉴定。 结果： 1、建立了稳定的成年大鼠骨骼肌组织来源的干细胞分离、培养、纯化方法。 2、分离纯化后的细胞约96﹪表达成肌细胞标志蛋白desmin，不表达成肌调节因子、卫星细胞标志蛋白以及肌管标记蛋白；约90﹪以上的细胞表达间充质干细胞标志蛋白；不表达神经干细胞和造血干细胞标志蛋白。成肌分化条件下，这些干细胞可形成肌管。 3、骨骼肌组织来源的干细胞在神经干细胞培养条件下可形成球样结构，类似神经球，开始表达神经干细胞标志蛋白，而desmin以及多种成肌相关分子的表达逐渐减弱或消失；细胞因子进一步定向诱导后，这些神经干细胞样的细胞可分化形成成熟的神经元，分化比例约为20﹪；定向分化形成多巴胺能神经元的比例约为6﹪。 结论:本研究首次对成年大鼠骨骼肌组织来源的干细胞体外分化为多巴胺能神经元进行了系统性研究。分离培养的成年大鼠骨骼肌来源的干细胞经鉴定后为成肌细胞，并具有间充质干细胞的特性；在神经干细胞优势培养基诱导条件下，这些细胞能够向神经外胚层转化，并在特定细胞因子环境中分化形成一定比例的多巴胺能神经元，为自体移植治疗帕金森病奠定了基础。