YAP在碱烧伤诱导兔角膜新生血管形成中的表达及意义

来源 :桂林医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zouxudong163
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目的:探讨Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)在碱烧伤诱导的兔角膜新生血管形成过程中的表达变化及意义,为治疗角膜新生血管提供新的探索。方法:选取健康的成年新西兰白兔17只,共34只眼,采用随机数字表法将兔分为对照组(不做任何处理)2只兔4只眼、实验组(建立碱烧伤模型)15只兔30只眼。实验组双眼同时建立碱烧伤诱导的兔角膜新生血管(corneal neovascularrization,CNV)模型,在碱烧伤后1天、4天、7天、10天和14天分别在显微镜下观察兔CNV的生长情况并进行照相记录,然后用图像分析软件对CNV的面积及长度进行测量;经过观察后在每个时间点取兔角膜标本制作组织冰冻切片,用免疫荧光法检测角膜组织中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达;提取角膜组织蛋白,用Western blot法检测YAP及VEGF的表达;提取角膜组织mRNA,用实时荧光定量PCR法检测YAP、VEGF、大肿瘤抑制因子(Large tumor suppressor,LATS)、TAZ-TEA域家族成员(TEA domain family member,TEAD)的表达;运用Pearson相关性分析方法分析YAP与VEGF表达的相关性。结果:实验组角膜新生血管长度、面积随着碱烧伤后时间增加呈曲线改变。碱烧伤后1天,裂隙灯显微镜检查发现实验组可见角膜缘血管扩张;CNV长度和面积均无明显差异(P长度>0.05,P面积>0.05)。碱烧伤后4天,实验组可见CNV沿角膜缘向角膜中央生长,CNV长度和面积均高于烧伤后1天,差异均具有统计学意义(P长度<0.05,P面积<0.05)。碱烧伤后7天,实验组CNV长度近碱烧伤区域边缘;CNV长度和面积高于烧伤后4天,差异均具有统计学意义(P长度<0.05,P面积<0.05)。碱烧伤后10天,实验组CNV长度到达碱烧伤区域的边缘;CNV长度和面积高于烧伤后7天,差异均具有统计学意义(P长度<0.05,P面积<0.05)。碱烧伤后14天,实验组CNV长度跨越碱烧伤区域边缘;CNV长度和面积高于烧伤后10天,差异均具有统计学意义(P长度<0.05,P面积<0.05)。免疫荧光法检测发现,实验组CNV中VEGF表达均比对照组增强,其中各个时间点新生血管中VEGF表达与CNV面积及长度变化一致。实验组碱烧伤后YAP、VEGF蛋白表达显著增加,第7天达高峰,随后逐渐下降,且YAP与VEGF表达趋势一致;运用Pearson相关性分析方法验证YAP蛋白与VEGF蛋白的表达具有相关性;碱烧伤后分别将1天、4天、7天、10天、14天的YAP、VEGF的表达与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。YAP、VEGF、TEAD mRNA表达均高于对照组,其表达趋势与CNV生长趋势一致,LATS mRNA表达低于对照组,其表达趋势与CNV生长趋势相反;运用Pearson相关性分析方法验证YAP mRNA与VEGF mRNA的表达具有相关性;碱烧伤后分别将1天、4天、7天、10天、14天的YAP、VEGF、TEAD、LATS mRNA的表达与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论:Hippo/YAP信号通路可能参与碱烧伤诱导兔角膜新生血管的形成,并且与VEGF表达相关。
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