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目的:早发性卵巢功能不全(Premature ovarian insufficiency,POI)是一个病因复杂,具有高度遗传异质性的疾病,也是女性内分泌研究的热点,严重影响了育龄期女性的生育健康,但是目前尚无有效的POI治疗措施。本研究通过探讨烟酰胺单核苷酸(Nicotinamide mononucleotide,NMN)对POI大鼠卵巢的卵泡发育的影响,以期更好地为临床提供一个潜在的治疗策略,进一步为研究POI靶向调控药物提供新思路。方法:通过腹腔注射化疗药物环磷酰胺(CTX)的经典方法构建POI大鼠模型。59只8周龄SD雌性大鼠适应性喂养6天,随机分组,其中对照组(Control)15只、模型组(CTX-POI)44只。模型组大鼠使用CTX腹腔注射2周,对照组予以腹腔注射等体积的生理盐水。经分析动情周期、血清性激素和卵巢形态的变化初步鉴定模型制造成功后,将POI组随机分为治疗组(CTX-POI-NMN)和模型组(CTX-POI)进行后续实验。第一部分:通过阴道涂片监测各造模组大鼠治疗期间的动情周期的变化;麻醉大鼠后取腹主动脉血,检测大鼠血清中卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、雌激素(estrogen,E2)等性激素含量。摘除大鼠卵巢,通过苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin,HE)观察卵巢组织形态及计数各级卵泡数目;各组取3只雌鼠与1只雄鼠进行合笼3天受孕后,将雄鼠取出,1月后计算其产崽数量的差异;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)和免疫组织化学方法(Immunohistochemistry,IHC)分别检测大鼠卵巢组织促调亡相关因子(Bax)、抑凋亡因子(Bcl-2)的m RNA和抗原的表达水平。第二部分:采用靶向代谢组学测定卵巢能量代谢产物的影响;采用转录组方法分析差异基因的表达及预测分子信号通路;进一步采用q RT-PCR和IHC分别检测大鼠卵巢组织烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)、沉默信息调节蛋白4(SIRT4)及人叉头框蛋白O3(FOXO3)的m RNA和抗原表达情况。结果:(1)通过动情周期、血清性激素、卵巢形态学、各级卵泡数目、生育力及卵巢组织中凋亡因子的差异表达等指标发现POI大鼠动情周期紊乱、FSH较正常组极显著升高(5.21±0.24 vs 1.61±0.91,P<0.01),E2显著极显著降低(83.46±11.36 vs 133.90±10.68,P<0.01),卵巢内闭锁卵泡数目极显著增多(110.00±28.601 vs 36.50±9.387,P<0.01),原始卵泡数目显著减少(8.83±0.983 vs 14.17±5.076,P<0.05);而其余各级卵泡数目有所减少,但差异不显著(初级卵泡:37.67±6.772 vs 47.67±13.866,P>0.05;次级卵泡:41.00±7.266 vs 44.83±8.400,P>0.05),POI大鼠的产崽数量极显著低于正常组(2.00±3.464 vs 15.33±2.082,P<0.01),且Bax的含量显著上升(P<0.05)而Bcl-2的表达则及显著下降(P<0.01),表明CTX诱导POI大鼠模型成功。经NMN治疗后,动情周期、血清性激素、生育力及卵巢组织凋亡因子的表达与对照组无差别,卵泡数目较模型组相比,闭锁卵泡数目极显著下降(110.00±28.60 vs 26.17±15.54,P<0.01),原始卵泡数目极显著上升(8.83±0.98 vs 13.17±4.62,P<0.01),初级卵泡数目、次级卵泡数目有所上升,但差异不显著(37.67±6.77 vs 42.00±9.10,P>0.05;41.00±7.266vs 44.83±8.400,P>0.05),证明NMN治疗可改善POI大鼠卵泡募集后的发育。(2)通过靶向代谢组学得出补充NMN可以增加体内NAD+水平及ATP水平,转录组筛选并分析各组大鼠卵巢差异基因表达,经生信分析预测得出分子路径为NAMPT-SIRT4-FOXO3。通过q RT-PCR和IHC方法检测NAMPT、SIRT4和FOXO3在卵巢组织中的表达得出,CTX-POI组与Control组相比,NAMPT的表达含量显著降低(P<0.05),SIIRT4含量明显增高,但差异不显著(P>0.05),FOXO3的含量极显著增高(P<0.01),经过NMN治疗后NAMPT的表达含量显著升高(P<0.05),SIIRT4与FOXO3的含量极显著降低(P<0.01),进一步验证了NMN可能通过NAMPT-SIRT4-FOXO3的信号途径调控POI大鼠卵泡发育,保护卵巢储备,进而改善生育能力。结论:NMN可显著改善POI大鼠卵巢的内分泌功能、抑制颗粒细胞的凋亡、减少闭锁卵泡的形成、促进各级卵泡的发育,从而缓解和治疗POI大鼠的早发性卵巢功能不全症状;其机制可能是NMN通过NAMPT-SIRT4-FOXO3信号通路,显著提高卵巢NAD+水平,进而增加卵巢ATP水平,抑制卵泡颗粒细胞凋亡,维持卵泡发育所需要的能量,促进卵泡发育,NAMPT-SIRT4-FOXO3信号通路有望成为人为干预控制原始卵泡过度激活、改善POI患者卵泡丢失和生育力提供新的治疗策略和药物靶点。