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新型抗体—单域抗体(也称为纳米抗体，VHH)除具有传统单克隆抗体的高特异性（靶向）的特性之外，更具有稳定性强、可溶性好、易表达、免疫原性弱、穿透性强、人源化简单，制备成本低廉等独特优势，产业化应用前景广阔。有研究表明，CD27-CD70信号通路在免疫调控和免疫耐受方面起着重要作用，人CD27(hCD27)的激动型mAbs具有良好的抗肿瘤的效果。本研究的目的为应用哺乳动物细胞高效瞬时表达平台，噬菌体展示纳米抗体技术平台和自主构建的纳米抗体生物学活性检测平台，构建并筛选具有激活活性的抗人CD27纳米抗体，期望后继开发成为具有肿瘤免疫治疗作用的创新纳米抗体药物。 本研究通过周期性的免疫骆驼，构建了两个库容高达2.2×109CFU和3.4×109CFU和VHH正确插入率为95.8％和100％的高质量文库。利用噬菌体表面展示技术、PE-ELISA技术，从两个高质量的免疫文库中筛选获得99个55种CD27特异性纳米抗体。进一步，利用基于流式细胞仪(FACS)的纳米抗体生物学活性检测技术，从99个CD27特异性纳米抗体筛选出3株亲和力高，平衡解离常数为4.66×10-10M-1.74×10-9M，热稳定性好，Tm值52℃以上的候选激活型纳米抗体(Nb47、Nb64和Nb88)。抗体表位分析发现Nb47和Nb88两个纳米抗体与已处于临床Ⅰ期的靶标人CD27的激动型单抗CDX-1127(BMK)表位一致，而Nb64与其结合表位部分重叠，提示3株纳米抗体均可能具有抗肿瘤活性。进一步通过构建的模拟CD4+T细胞的NF-κB-Luciferase系统检测结果显示，3株纳米抗体均具有与CD70、BMK同等的激活活性。 综上，本研究成功筛选出Nb47、Nb64和Nb883株具有激活活性的抗人CD27纳米抗体，与处于临床研究Ⅰ期的单抗药物BMK具有相同或重叠结合表位，并具有与CD70、BMK同等的激活活性，具有抗肿瘤活性潜能;同时，该3株纳米抗体具有热稳定性好、亲和力高等特性，有望后继开发成为具有肿瘤免疫治疗作用的创新纳米抗体药物。