【背景】胃癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，其发病率全球第二，死亡率第四,我国是其高发地区之一。手术切除为胃癌的主要治疗方法，但其5年生存率仅为20-25%，联合治疗（术前术后的放化疗及术中的化疗）的5年生存率为30-35%，术前的放化疗至多引起20-30%的患者病理完全缓解且单纯的术前化疗很少引起病理完全缓解，世界范围内，尽管有所提升，进展期胃癌患者的治愈率仍然很低，化疗是其主要的姑息性治疗方法，大约20-40%的患者能存活8-10个月。尽管不断有新的方法运用于胃癌的诊断和治疗，但是胃癌患者的预后还是不尽人意。近些年来众多与胃癌发生发展相关的基因和分子通路的发现，对于阐明胃癌发病机制和改善胃癌患者的预后有重大意义。近一年来，大量的原癌基因和抑癌基因被鉴定，但其确切的分子机制尚不清楚。Growth arrest-specific gene1（Gas-1）生长阻滞特异基因，1988年Gas-1被定义为阻滞转录上调NIH3T3细胞周期的6个基因中的一个，抑制细胞周期G0到S期。为磷脂酰肌醇糖基(GPI)相关蛋白，最初认为与成纤维细胞的接触抑制有关，45KDa，其诱导生长停止依赖p53，定位于一个脆性部位，在肿瘤细胞内被频繁删除。既往研究显示：在神经胶质瘤中，过表达的Gas-1抑制肿瘤生长和恶化；在结肠癌II期和III期有助于复发转移预测；在黑色素瘤和前列腺癌与转移负相关，表明GAS-1与抑制肿瘤转移相关。但其在胃癌组织的分布及其作用目前未见报道，其在胃癌发生发展中的机制尚不清楚。【目的】1.检测Gas-1在胃癌癌组织和胃癌细胞系中的表达，讨论其与临床病理特征和临床分期的关系，探讨其在胃癌发生和进展中的意义。2.观察GAS-1对胃癌细胞增殖能力的影响及其与细胞凋亡的关系。3.探讨Gas-1影响胃癌细胞增殖的可能分子机制。【方法】1.免疫组化法检测Gas-1在胃癌和癌旁正常组织中的表达，Western blot检测Gas-1在新鲜胃癌组织标本中的表达。2. Western blot检测胃黏膜上皮细胞GES和胃癌细胞系（SGC7901、MKN45、MKN28和AGS）中Gas-1的蛋白的表达。3.转染Gas-1特异siRNA载体入胃癌SGC7901细胞上调Gas-1表达，将Gas-1基因的真核表达载体转染入AGS细胞下调Gas-1表达，G418筛选获得稳定转染的细胞克隆。4.应用MTT实验、平板克隆实验、软琼脂集落形成实验等观察Gas-1对转染细胞体外生长增殖能力的影响。5.裸鼠成瘤实验检测转染细胞改变Gas-1表达后的体内成瘤能力的变化。6.应用流式细胞术、Hochest33258染色观察Gas-1对转染细胞凋亡的影响。7. Western blot检测上述转染细胞中细胞凋亡相关分子Bcl-2、Bax和Caspase-3的变化。【结果】1. Gas-1在胃癌组织和胃癌细胞系中的表达显著下降。我们应用免疫组化检测161位胃腺癌患者手术石蜡切片中gsa-1的表达，发现Gas-1主要表达于胃癌细胞的胞质，少量表达于细胞膜。Gas-1在胃癌组织的表达阳性率为52.8%(85/161)，显著低于胃癌旁组织的表达阳性率96.3%(156/161)（P<0.05），胃癌组织染色得分显著低于癌旁组织（1.81±1.42vs8.32±2.43）高分化腺癌的Gas-1表达明显高于低中分化腺癌（P<0.05），Gas-1在TNM III期和IV期患者的胃癌组织染色得分明显低于I和II期的表达（P<0.05）Gas-1的表达水平与患者的性别、年龄和肿瘤是否转移无关。随后我们对其中74例患者的生存时间进行分析，结果显示高表达Gas-1的患者生存时间较不表达或低表达Gas-1患者生存时间显著延长，表明低Gas-1表达水平与患者的生存时间正相关。我们收集8例胃腺癌患者手术切除新鲜组织,提取相应的蛋白，随后进行了western bolt分析，结果与病理切片结果一致，即胃癌组织Gas-1的表达显著低于癌旁正常组织组织。应用western bolt的方法，检测胃癌细胞系SGC7901，AGS，MKN45，MKN28及胃粘膜上皮细胞系GES中Gas-1蛋白的表达水平，结果显示：GES细胞系表达高于各个胃癌细胞系，在胃癌细胞系里，SGC7901较高，AGS较低。2. Gas-1对胃癌细胞体内外生长增殖能力及对凋亡的影响。我们将构建好的特异siRNA载体稳定转染Gas-1高表达的胃癌细系SGC7901，抑制Gas-1的表达，各种生长增殖实验显示：转染后的SGC7901细胞体外增殖加快；在平板和软琼脂上形成克隆的能力增强，裸鼠体内成瘤能力增强，瘤体积明显增大，表明低表达Gas-1在体内外促进胃癌细胞的生长增殖,流式细胞仪检测细胞的凋亡率显著降低,Hoechst33258染色结果显示，转染细胞凋亡细胞数目减少；而真核转染过表达Gas-1载体的AGS细胞系，细胞体外增殖减慢，平板和软琼脂上形成克隆的能力减弱，裸鼠体内成瘤能力也减弱，瘤体积明显减少,表明过表达Gas-1在体内外抑制胃癌细胞的生长增殖；流式细胞仪检测细胞的凋亡率显著增高；Hoechst33258染色结果显示，转染细胞凋亡细胞数目增加。表明低表达Gas-1抑制细胞凋亡而过表达Gas-1促进细胞凋亡。3. Gas-1调控相关细胞凋亡分子。通过western bolt检测转染siRNA的SGC7901细胞细胞凋亡相关分子的表达，Bcl-2/Bax比率增加，Caspase-3酶活显著降低，免疫组化检测裸鼠肿瘤组织的表达，发现Bcl-2显著增加而Caspase-3表达降低；而转染过表达Gsa-1载体的AGS细胞Bcl-2/Bax比率降低，Caspase-3酶活显著增高，免疫组化检测裸鼠肿瘤组织的表达，发现Bcl-2显著降低和Caspase-3表达增高。表明Gas-1通过降低Bcl-2和提高capase-3活性促进细胞凋亡。【结论】1.无论在病理切片还是新鲜组织标本，胃癌组织Gas-1的表达明显低于癌旁组织，Gsa-1的低表达与胃癌患者的临床分期及预后有密切关联，预示Gas-1在胃癌的发生发展中发挥重要作用。2.过表达的Gas-1可以通过促进胃癌细胞的凋亡达到抑制胃癌细胞在体内和体外生长增殖，低表达Gas-1抑制胃癌的凋亡达到促进胃癌细胞的生长增殖。3. Gas-1至少部分通过降低Bcl-2/Bax比率及激活Caspase-3活性促进细胞凋亡，从而抑制胃癌细胞的生长增值能力。