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背景: 由脑血管病、外伤、中毒和一些免疫性疾病所导致的脑损伤患者目前越来越多,大量的残疾患者给家庭和社会带来了沉重的负担。目前针对这些残疾的治疗手段有限,到了后期治疗效果更是越来越差。现在疾病的早期治疗主要是尽量减轻脑损害,后期主要是进行功能锻炼等康复医疗措施。对于脑功能的恢复机制目前没有一个统一的定论,多数人认为是脑功能的重建,即由于神经系统可随环境的改变而发生适应性变化:皮质代表区会因为训练和运动技巧的获得而发生修饰,出现神经突起的发芽、新突触的形成、突触受体敏感性的调节、递质释放的变化、神经通路的重新组合以及一些潜在神经通路的开放,最终出现受损部位的功能由正常与之无关的其他部位来代替,即脑功能被重新代偿,表现为患者丧失的功能重新恢复[1-8]。 如何促进这个康复进程呢?既然现在认为大脑损伤后具有巨大的发生重塑的潜质,我们现在所要做的就是需要进一步认识重组所涉及的部位、以及他的发生、发展及影响因素、重组过程中有哪些代谢或蛋白的变化。为我们临床施加有力地干预治疗措施提供依据或方向,最终使大脑的抗损伤及重塑得以更容易地进行、并向着最大限度恢复患者受损功能的方向发展。 目的: 首先通过神经示踪寻找神经康复过程中的一些脑功能变化区域,提高我们对脑梗死后相关蛋白表达变化的认识,通过对这些脑区双向电泳,期望找出与脑功能变化相关的差异蛋白,筛选出与神经修复相关的一些蛋白,以达到通过干预这些蛋白来促进重组进程的目的。 方法: 本实验分三部分:第一部分,脑梗死后的神经示踪研究;第二部分,脑梗死后的皮质蛋白组学研究;第三部分,脑梗死后的胼胝体蛋白组学研究。 主要方法及技术路线如下: 1.利用BDA在对照和梗死后的大鼠皮质和纹状体进行神经示踪,染色观察与梗死区相联系的脑区情况,找出脑功能变化区,结合文献确定下一步实验的取材部位。 2.参照本研究中脑梗死后的脑功能变化脑区,在模型动物上取相应区域的脑组织,样品经预处理,进行双向凝胶电泳分离蛋白、考马斯亮蓝染色。将图象分析的差异蛋白质斑点脱色,酶切,进行基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF)分析。所得数据在MSDB、NCBInr和Swissprot数据库检索、鉴定蛋白质。 结果: 1.神经示踪显示,脑梗死后与梗死区联系密切的功能变化脑区包括:脑梗死灶周边皮质、对侧镜像区皮质、双侧纹状体以及胼胝体,脑梗死后这些部位示踪剂显色增强、分布广泛。 2.与对照相比,梗死灶对侧和周边的皮质均有明显的差异蛋白表达,但是梗死灶周边的差异蛋白更多。 3.与对照相比,第5、15天组梗死灶周边差异蛋白大部分表达下调,左侧上调和下调的比例相差不大。 4.右侧大脑皮质差异蛋白有39个,成功鉴定13个,只有2个表达上调;左侧大脑差异点12个,但是均未能够成功鉴定。成功鉴定的蛋白主要涉及应激、神经生长、凋亡、能量代谢和信号转导等功能。 5.胼胝体发现差异蛋白43个,成功鉴定19个,主要是一些中间丝蛋白、应激蛋白、信号转导、神经生长发育相关的蛋白和一些突触囊泡蛋白,这些蛋白大多数是表达增高的。 结论: 1.脑梗死后,与梗死区相关的部位有功能的变化,有蛋白表达水平的改变,主要是梗死灶周边、健侧镜像区、胼胝体和皮质下结构。 2.梗死灶周边的差异蛋白量明显比健侧多,第5、15天组梗死灶周边差异蛋白表达多数下调。 3.胼胝体在梗死后出现明显的差异蛋白表达,主要是一些中间丝蛋白、应激蛋白、信号转导、神经生长发育相关的蛋白和一些突触囊泡蛋白。这些蛋白多数是表达上调。