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目的：慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种肺部慢性炎症性疾病,其特征是炎症细胞活化和炎症介质的释放。白细胞介素-33(IL-33)是具有免疫调节作用的白细胞介素-1(IL-1)家族新成员,在各种炎症和免疫疾病中起着重要作用,但IL-33是否参与COPD发病机制仍不清楚。本部分实验目的在于探讨IL-33及其受体ST2和IL-1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)在COPD患者中的表达水平。方法：应用酶联免疫吸附法检测112例COPD患者和115例对照组血浆IL-33、ST2、IL-1RAcP的浓度,并用流式细胞术检测外周血细胞IL-33表达情况；将12例因肺部非肿瘤性疾病行肺叶切除术患者按肺功能情况分为COPD组(6例)和对照组(6例),用免疫荧光染色法检测气道IL-33的表达情况,并用Western Blot方法对气道组织中IL-33蛋白水平进行分析。结果：与对照组相比,COPD组血浆IL-33、ST2、IL-1RAcP浓度均升高,外周血中IL-33主要由淋巴细胞表达,COPD组IL-33阳性淋巴细胞比例明显高于对照组,中性粒细胞中IL-33阳性比例较低,两组无显著性差异。IL-33在肺内主要表达在气道上皮细胞,COPD组平均荧光强度高于对照组,且COPD组气道组织中IL-33蛋白水平较对照组明显升高。结论：IL-33、ST2和IL-1Racp在COPD患者中的表达均升高,且IL-33主要来源于外周血淋巴细胞和气道上皮细胞。目的：吸烟是COPD发病的重要危险因素,香烟中的有害成分刺激机体产生多种炎症介质,参与COPD的发生和进展,香烟烟雾是否可以直接诱导IL-33的表达尚不清楚,因此,研究香烟烟雾对IL-33表达和释放的影响是本部分实验的目的。方法：12只小鼠随机被分为对照组和熏烟组；熏烟组小鼠分别暴露于香烟烟雾中8个月,用HE染色法观察肺组织形态学改变,Real-time PCR法检测小鼠PBMCs中IL-33和ST2的转录,ELISA方法检测小鼠血浆IL-33和ST2的释放,Western Blot法检测小鼠气道中IL-33的蛋白表达量；培养HBE细胞,分成4组：对照组(CM组),CSE组,LPS组,CSE+LPS组；Western Blot法检测各组IL-33的表达水平,ELISA方法检测细胞培养上清中IL-33水平,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞的损伤和凋亡。结果：与对照组相比,熏烟组小鼠肺泡间隔破坏明显；熏烟组小鼠PBMCs的IL-33和ST2基因转录水平和血浆IL-33和ST2浓度较对照组升高,熏烟组小鼠气道中IL-33的蛋白表达也明显升高；另外,体外细胞实验证实CSE和LPS能够刺激HBEs IL-33表达增加,细胞培养上清中IL-33的浓度也呈现相应的增高趋势。结论：吸烟可以刺激IL-33在机体内的表达和释放,在体外条件下,CSE和LPS能够促HBE中IL-33表达和释放。目的：探讨TLR4是否参与调节香烟烟雾致IL-33的表达,研究TLR4基因单核苷酸多态性与吸烟者IL-33的差异表达的关系。方法：24只小鼠随机分为4组：对照组,TAK242腹腔注射组,香烟烟雾暴露组,TAK242腹腔注射+香烟烟雾暴露组,每组6只；Western blot法检测TLR4和IL-33在小鼠气道中的蛋白表达量,Real-time PCR法检测小鼠PBMCs TLR4和IL-33基因的转录水平；培养HBE细胞,分成6组：对照组,TAK242组,CSE组,CSE+TAK242组,LPS组,LPS+TAK242组,Real-time PCR法和Western Blot法检测各组IL-33和TLR4的基因转录和蛋白表达。测序法检测20例吸烟健康者和20例吸烟COPD患者中TLR4基因rs4986790、rs4986791和rs11536889位点多态性。结果：动物实验中,与对照组相比,小鼠气道组织中TIL4和IL-33的蛋白表达水平在S组显著升高,小鼠PBMCs TLR4和IL-33的基因转录水平在S组也明显升高,且TAK242可以明显抑制香烟烟雾暴露小鼠气道和PBMCs中IL-33的表达。体外细胞培养实验中,与对照组比较,CSE可以诱导HBEs TLR4mRNA转录和蛋白表达水平增加,且TAK242可以明显抑制CSE和LPS诱导的IL-33表达。TLR4基因单核苷酸多态性检测结果显示：在所有研究对象中,rs4986790位点和rs4986791位点均未发现等位基因,健康吸烟者组和COPD患者组之间rs11536889位点等位基因的频率无显著性差异,两组中来自rs11536889位点GG基因型的受试者与来自CG基因型的受试者血浆IL-33蛋白水平比较均未见显著性差异。结论：TLR4参与香烟烟雾诱导的IL-33表达调控,TLR4基因单核苷酸多态性可能与吸烟者IL-33的差异表达无关。