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目的探讨microRNA-124在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中调控细胞自噬的机制。方法选取重量250-280 g之间的8周龄雄性Sprague-Dawley大鼠为研究对象,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型。实验大鼠随机分为对照组、假手术组(sham组)、脑缺血再灌注组(CI/R组)(分再灌注3h,6h,12h,24h)、CI/R+miRNA-124激动剂组(CI/R+miR124 agomir组)、CI/R+miRNA-124抑制剂组(CI/R+miR124 antagomir组)、CI/R+miRNA对照组(CI/R+miR-control组)及STAT3抑制剂组(STAT3 inhibitor组)和STAT3对照组。运用TTC染色和Zea Longa神经功能缺损评分法评估造膜效果,HE染色检测大鼠脑组织病理学改变,采用RT-qPCR技术检测大鼠脑组织microRNA-124表达变化,运用western blot技术及免疫组化方法分析大鼠脑组织中细胞自噬相关蛋白的表达及分布,采用荧光素酶报告基因技术验证microRNA-124的作用靶点。结果1 microRNA-124在神经细胞中有一定表达(1.00±0.10),且随脑缺血再灌注不同时间点呈现动态变化:于大鼠脑缺血再灌注3h即开始明显增加(2.86±0.40),再灌注12h达峰值(6.68±0.78);Western blot结果显示再灌注3h,Beclin1(0.946±0.010)、LC3II/LC3I(0.535±0.006)均明显增加,于再灌注24h达最高。Bcl-2在再灌注3h时(0.704±0.011)显著增加,至再灌注12小时(1.286±0.037)达峰值,之后开始下降(0.815±0.002)。免疫组化显示,Beclin1、LC3和Bcl-2主要分布在细胞质;HE染色显示,与对照组神经缺血细胞阳性数(0.40±0.55)比较,再灌注3h组神经缺血细胞数(4.00±0.70)明显增多,差异有统计学意义(P<0.05),且呈时间依赖性。2与CI/R+miR control组比较,CI/R+miR124 agomir组中神经功能缺损评分(1.00±0.00 vs 3.00±0.00)和脑组织切片神经缺血细胞计数(4.00±1.00 vs 14.33±1.15)均明显降低(P<0.05),同时自噬相关蛋白Beclin1(0.981±0.028 vs 0.545±0.009)和LC3II/LC3I(1.087±0.031 vs0.875±0.038)均明显升高(P<0.05),而Bcl-2(0.578±0.022 vs 0.805±0.080)表达水平明显降低(P<0.05)。CI/R+miR124 antagomir组结果相反。3与STAT3阴性对照比较,STAT3-WT组荧光强度明显降低(P<0.05),而STAT3-MUT组荧光强度未见明显改变;Western blot分析显示CI/R+miR124 agomir组中STAT3(0.426±0.012vs 0.800±0.029)、p-STAT3(0.140±0.019 vs 0.736±0.036)水平均明显降低(P<0.05)。在STAT3抑制剂组中microRNA-124上调自噬的作用减弱,STAT3inhibitor组与miR-124 agomir组相比,Bcl-2表达水平明显降低(0.769±0.076 vs0.436±0.021)(P<0.05),而Beclin1(0.793±0.046 vs 1.113±0.090)和LC3II/LC3I(0.158±0.006 vs 0.750±0.026)表达明显升高(P<0.05)。结论在脑缺血再灌注损伤中,microRNA-124通过作用STAT3提高细胞自噬水平,达到神经细胞保护作用。为临床治疗脑缺血再灌注损伤提供了新的思路和方向。图27幅;表17个;参148篇。