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水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)水稻病毒属(Oryzavirus)的成员。RRSV基因组包含10条dsRNA,编码11种蛋白质,其中包括8种结构蛋白和3种非结构蛋白。该病毒引起的水稻齿叶矮缩病在我国南方发病严重,对当地的水稻生产造成严重影响,成为我国水稻生产上的重要病害。本文通过建立水稻原生质体培养体系,制备RRSV抗血清,通过免疫荧光、荧光定量PCR及Western blot检测技术研究RRSV编码3个非结构蛋白(Pns6、Pns7和Pns10)及主要外壳蛋白P8的基因在水稻原生质体内的复制与表达情况。结果表明：(1)通过原核表达制备的抗血清经Western blot和间接ELISA的方法检测证明其可用于病毒检测的应用；(2)通过免疫荧光标记RRSV Pns10,激光共聚焦显微镜观察,发现病毒粒子可以成功侵染水稻原生质体,并可形成类似于病毒原质的组分,该组分随着侵染时间的延长而逐渐发生聚集；(3)利用荧光定量PCR技术,通过对病毒侵染水稻原生质体不同时间段进行动态分析发现,在接种病毒后的60 h内,RRSV各检测基因在8 h时开始积累,后均呈上升趋势,表达非结构蛋白的S6、S7、S1O在24 h左右mRNA表达量达到最大值,表达CP的S8基因在32 h左右增值达到最大值,此后表达量均开始下降,但仍保持在较高水平,该结果表明在病毒侵染水稻原生质体细胞24-32 h时达到复制转录高峰期；(4)以制备的RRSV抗血清为探针,通过Western blot检测到病毒侵染原生质体后,非结构蛋白Pns7和Pns10在12 h开始表达,在32 h左右达到最大值,结构蛋白P8在24 h开始表达,在48 h左右达到最大值,表明非结构蛋白先于外壳蛋白表达,RRSV粒体在侵染水稻原生质体24 h开始增殖,48 h左右达到最大值；(5)通过烟草的瞬时表达体系表达RRSV4个目的基因和YFP的融合蛋白,在激光共聚焦显微镜下观察黄色荧光在烟草细胞中的分布,发现RRSVPns6在细胞膜处,可以形成小颗粒状聚集体,Pns7可能定位在细胞质,P8作为主要外壳蛋白定位在细胞核,Pns10可在细胞内形成大量的颗粒状聚集体,形成类似于病毒原质的颗粒状内含体。