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哺乳动物听力系统由于年老、耳毒药物、感染、过度刺激等原因引起的耳蜗毛细胞的丧失是不可逆的,会引起永久性感音神经性听力下降。为了恢复听力,就必须产生新的有功能的毛细胞,通过转染毛细胞发育的正向调控基因:Math1可以使耳聋耳蜗内的非感觉细胞的表型发生转分化产生新生毛细胞,而新生毛细胞与耳蜗残存的螺旋神经产生联系是其获得功能的必要前提,所以耳蜗残存螺旋神经的保护尤为重要;NT3是神经系统发育和功能维持的重要物质,是内耳发育最基本的营养因子之一,对后天性损伤的耳蜗螺旋神经有保护和促进恢复的作用。本实验,我们对NT3、Math1基因转染新生小鼠离体耳蜗基底膜进行了研究,结果如下:
1:成功构建分别包含目的基因NT3、Hath1的重组真核表达载体pIRES2-EGFP-NT3和pIRES2-DsRed2-Hath1。以阳离子脂质体作为载体,用pIRES2-EGFP-NT3质粒转染新生小鼠离体耳蜗基底膜,发现基底膜能被转染,但转染效率欠佳。
2:成功构建包含目的基因NT3的重组腺病毒载体Ad—DsRed2-NT3。将之转染新生小鼠离体耳蜗基底膜,再加庆大霉素处理3天,发现:NT3过表达对庆大霉素引起的耳蜗螺旋神经损伤有保护作用,而未加病毒组和加病毒Ad—DsRed2组没有这种现象。
3:成功制备包含目的基因Math1的重组腺病毒载体Ad—GFP—Math1。将之转染新生小鼠离体耳蜗基底膜7天后,发现在大上皮嵴和次上皮嵴区域有新生毛细胞生成,表现为肌球蛋白VⅡa免疫荧光阳性。Ad—GFP组和不加病毒组没有这种现象。
4:Ad—DsRed2-NT3、Ad—GFP—Math1能有效共转染新生小鼠离体耳蜗基底膜。