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器官移植在医学界的运用已经相当广泛,虽然小肠移植的成功率相对于肝、肾等其他器官还比较低。但是这种方法已经可以在临床运用于短肠综合症及其他患有无法治愈的小肠疾病的患者。n-3多不饱和脂肪酸以鱼油的形式存在,许多研究证实其具有抵抗炎症反应及免疫调节的机制。
本研究的目的在于运用大鼠同种异体小肠移植慢性排斥模型,观察n-3多不饱和脂肪酸对于移植肠粘膜细胞凋亡以及肠粘膜细胞巾颗粒酶、穿孔素和CI-MPR表达的调控作用。并且运用绿色荧光蛋白标记大肠杆菌技术,研究n-3多不饱和脂肪酸对移植肠细菌易位的影响。小肠移植使用的动物选用F344和Lewis大鼠,共分为3个试验组,分别足:1、Lewis—Lewis同基因移植组2、F344-Lewis玉米油对照组3、F344-Lewis鱼油试验组。于术后0─13天给与肌肉注射环孢霉素A(Cyclosporine A)5 mg/kg/d。其中1、2两组脂肪来源为玉米油,3组为鱼油。所有的动物喂食玉米油及鱼油的时间是由术前14天至术后60天。于术后12周终止试验,取材进行检测。细胞凋亡率定量检测采用流式细胞术,相关蛋白表达的检测运用RT—PCR的方法。对于细菌易位的观察,首先建立绿色荧光蛋白标记技术,再将标记好的大肠杆菌注入移植肠肠腔,运用荧光显微镜观察血液及腹腔液中的细菌易位。从试验数据中我们得出以下结论:1、在大鼠进行同种异体小肠移植后,肠粘膜细胞凋亡明显增加,颗粒酶、穿孔素和CI-MPR的表达显著增强。2、口服n-3 PUFA可以减少移植肠粘膜细胞的凋亡率,抑制上述三种凋亡相关蛋白的表达。3、发生慢性排斥的移植肠的细菌易位率明显高于同基因移植组,口服n-3PUFA可以降低移植肠的细菌易位发生率。细胞凋亡是细胞程序性的死亡方式,但是小肠移植后移植肠粘膜细胞的过度凋亡会引起肠粘膜屏障的损伤,从而提高细菌易位的发生率。颗粒酶、穿孔素和CI-MPR移植物的细胞凋亡中都起着十分重要的作用,我们在研究中也看到当移植物发生慢性排斥时,这三种蛋白的表达均显著升高。n-3PUFA具有抗炎及免疫调节作用,我们的实验中证实其可以降低移植肠粘膜细胞的凋亡率,并且抑制三种相关蛋白的表达。而且通过绿色荧光蛋白标记技术,可以证实n-3PUFA可以减低移植肠细菌易位的发生率。n-3PUFA的这些作用可以保护小肠移植后移植物的结构和功能,这对于延长移植物及受体的存活时间,提高受体的生存质量,减缓移植物的慢性失功有着重要意义。