【摘 要】
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目的:建立海马神经元培养癫痫持续状态(Status Epilepticus, SE)模型,探讨SE后锚蛋白G (Ankyrin-G, AnkG)的降解状况。方法:采用新生2天Sprague-Dawley (SD)大鼠,分离海马神经
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目的:建立海马神经元培养癫痫持续状态(Status Epilepticus, SE)模型,探讨SE后锚蛋白G (Ankyrin-G, AnkG)的降解状况。方法:采用新生2天Sprague-Dawley (SD)大鼠,分离海马神经元进行原代培养。培养第7天用神经特异烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学鉴定神经元。体外培养10天后,将其随机分为对照组和模型组,模型组包括SE后1h、3h、6h和24h共4个亚组。在模型组,用无镁生理基本记录液pBRS诱导海马神经元持续出现癫痫样高频放电。当癫痫样放电持续3小时后,恢复为含1mm氯化镁的pBRS。而对照组pBRS中始终含1mM氯化镁。Western blotting检测对照组及SE后1h,3h,6h,24h各亚组AnkG蛋白及其降解片段的表达水平。结果:1.海马神经元培养6-12小时后,大部分细胞即已贴壁,24小时后生长旺盛,很多细胞伸出突起,随时间延长形态多变,有双极或多个突起,逐渐形成网络。培养第7天NSE免疫细胞化学鉴定神经元结果显示,神经元特异性烯醇化酶阳性细胞率达95%以上。10天后,可见清晰的胞核及核仁,胞体发亮,周边有明显光晕,细胞之间形成典型的神经网状结构。2.SE后AnkG的降解状况:与对照组相比,完整AnkG的表达于1h时开始降低(p<0.05),3h,6h,24h均明显降低(p<0.01);AnkG于SE后1h-24h均有降解。与对照组相比,降解片段于3h时达高峰(p<0.01),6h继续保持,到24小时开始下降(p<0.01)。结论:AnkG的降解为癫痫持续状态损害的早期事件,可能是癫痫发生的关键环节。
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