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磷酸三酯酶,又称有机磷降解酶,是降解水果蔬菜表面有机磷农药残留的主要酶类,通过断裂有机磷农药分子中的磷酯键而使其农药毒性降低。磷酸三酯酶因其底物广谱性和催化高效性而备受学者们的关注。近年来,嗜热磷酸三酯酶以其高温条件下良好的热稳定性和有机溶剂抗性而被广泛应用于工业生产,具有良好的发展前景。本试验将来源于嗜热菌Thermaerobacter subterraneus DSM13965和Geobacillus Kaustophilus HTA426的磷酸三酯酶基因在大肠杆菌BL21中进行高效表达,产生重组磷酸三酯酶TS-PTE和GK-PTE。采用超声、热失活和组氨酸标签镍柱对两种产物进行分离纯化.通过SDS-PAGE和Western-blot对两种表达产物进行鉴定,发现两种重组酶均以二聚体形式存在。对两种重组酶进行初步酶学性质表征,结论如下：(1)两种嗜热磷酸三酯酶均是碱性高温酶,最适温度和最适pH相同,分别为70℃,pH10.0；酶活力检测显示,GK-PTE的酶活是TS-PTE的1.2倍；在70℃, pH10.0,两种嗜热磷酸三酯酶都具有良好的热稳定性,TS-PTE和GK-PTE的半衰期分别是1h和4h。(2)大多数有机溶剂都能提高TS-PTE/GK-PTE的活力,并且对TS-PTE的激活作用高于GK-PTE。随着有机溶剂浓度的增加,酶活力也随之提高,20%异丙醇可使GK-PTE酶活提高1.8倍,20%二甲基亚砜可使TS-PTE酶活提高3倍。乙腈对两种磷酸三酯酶的活力影响呈相反趋势。(3)大多数二价金属离子都是TS-PTE/GK-PTE的激活剂。Co2+和Zn2+的激活作用最显著,随着Co2+和Zn2+浓度增加,磷酸三酯酶活力也随之提高,2.0mM的Co2+和Zn2+都可使酶活力提高3倍；随着Mg2+和Ni2+浓度的增加,两种离子对磷酸三酯酶的激活作用转变成抑制作用；Ca2+和Ba2+对两种磷酸三酯酶的活力影响呈相反趋势。