染色质重塑复合物INO80对ANKRD1表达调控作用的研究

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INO80复合物是SWI/SNF家族的重要成员之一,是细胞内重要的染色质重塑酶,它能够调控细胞内多个重要基因的表达。INO80染色质重塑复合物结构非常复杂,由包括ARP8在内的多个亚基组成。INO80是一种ATP依赖的染色质重塑酶,在细胞内有ATP提供能量的情况下,它能够促使核小体在DNA上进行滑动,以改变DNA的可接近性;也能置换组蛋白变体H2AZ为正常组蛋白H2A从而改变染色质的结构。INO80复合物通过上述方式改变染色质结构从而对基因转录进行调控。MARP家族包括ANKRD1、ANKRD2和ANKRD23三种蛋白,他们在哺乳动物中高度保守。ANKRD1是一种胚胎基因,在胚胎及胎儿发育时期高表达,随着年龄的增加,其表达量会逐渐降低。该蛋白在调节心脏生长发育中发挥着多种生物学作用。经过许多临床实验证明,ANKRD1在心肌肥厚和心力衰竭的患者心脏中表达升高,是上述病症的标志物之一。而在前期实验中,我们在敲低了INO80的Hela细胞中进行了RNA-seq,发现很多基因的表达量发生了变化,其中包括ANKRD1,由此我们可以知道,ANKRD1的表达会被INO80调控。因此我们在Hela细胞中敲低了INO80及其亚基ARP8,观察ANKRD1的表达,发现其蛋白水平与mRNA水平均有所升高;另外,我们对在Hela细胞中进行ChIP实验的条件进行了摸索,而INO80的ChIP实验也证明它在ANKRD1启动子区有募集。在后续试验中,为了进一步验证ANKRD1在细胞中的作用,我们成功构建了pcDNA3.1-Flag-ANKRD1质粒,在实验室留存,以备后用。
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