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趋磁性细菌磁小体(BMPs)应用于免疫检测时具有很高的检测灵敏度,但许多方面仍然处于未知阶段,如影响抗体连接到BMPs的环境条件、抗体连接效率(LRA)对检测灵敏度的影响及与常用的酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗原的灵敏度相比如何?有待于研究。本文以羊抗兔抗体为例,进行了抗体连接到BMPs影响因子研究,并建立了以BMPs为抗体载体的荧光检测抗原的体系:应用所建立的检测体系对果树病毒-葡萄扇叶病毒(GFLV)和李属坏死环斑病毒(PNRSV)进行了检测;并与ELISA检测方法作了对比研究。 研究表明:影响抗体连接到BMPs上的因子是多方面的,并且抗体的连接效率与检测灵敏度有关;应用BMPs的荧光检测方法比ELISA方法灵敏105~106倍。 由实验结果得知,许多缓冲液可以作为羊抗兔抗体连接到BMPs反应体系的缓冲液,从实验所采用的12种常用缓冲液,在通常所使用的浓度与pH值条件下对LRA的影响研究得知,LRA变化范围为35~95 μg/mg。进一步对两种有机缓冲液(Tris-Cl,HEPES)和一种无机缓冲液(Na3PO4)的pH值和浓度研究表明,不同的缓冲液使LRA达到最高时的pH值和溶液浓度不同。当pH 5.6时10~20 mM的Tris-Cl,pH 3.5时20 mM的HEPES,pH 5.6时1~5 mM的Na3PO4,其LRA明显高于其他pH值和浓度条件下的。由此得知,偏酸的环境有利于抗体连接到BMPs,而且有机溶液的浓度较无机的高。温度对LRA也有影响,不同的连接温度使LRA达到最高的时间不同。在4-37℃之间连接抗体时,较高的连接温度使LRA达到最高所用的时间较短,4℃时需要12小时,室温(24℃)下需要4小时,37℃时需要2小时。在1 ml的反应体系中抗体用量越多,BMPs用量越少,获得的LRA越高。在1ml的连接体系中,当抗体的用量为300μg,BMPs用量为0.1 mg时,LRA可达762.6μg/mg。并且BMPs的质量与LRA有关,高质量的BMPs可以获得高的LRA。冷冻干燥BMPs对抗体连接效率有影响,使LRA降低;并且冷冻干燥前预处理方式使LRA有异,在液氮中预处理的BMPs的LRA明显高于在-70C和-20℃预处理的。超声波清洗器悬浮和摇床晃动有利于抗体的连接,缩短LRA达到最大值的时间。 抗体的连接效率与抗原检测的灵敏度有很大的关系,连接效率越高,抗原检测的灵敏度也越高。在对ELISA和以BMPs为抗体载体的荧光检测方法比较研究表明,对兔IgG检测时,后者的灵敏度比前者提高106倍;以羊抗兔IgG-兔IgG的抗体抗原关系所建立的应用BMPs的荧光检测体系对果树病毒(GFLV,PNRSV)的检测表明,其灵敏度是ELISA的106倍。由实验得出结论:以BMPs为抗体载体的荧光检测方法检测抗原时具有很高的检测灵敏度。