论文部分内容阅读
目的：当人体受到辐射时，可产生大量的活性氧（reactive oxygen species，ROS）和自由基（free radical，FR），细胞内的还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）抗氧化系统能够有效清除辐射所引起的ROS和FR，降低射线对细胞的损伤作用。本研究观察外周血淋巴细胞中GSH含量变化与辐射剂量之间的相关性，并建立GSH含量与辐射剂量之间的剂量-效应曲线，从而在职业受照射人员体检及辐射应急事故中，更快地进行生物剂量估算，并能够对不同辐射损伤程度的人群进行分类。方法：选取淋巴细胞计数在正常范围内的健康成人血标本120份，中位年龄42岁，男女比例为31:29，离体时间不超过4h，分成5个剂量组，每组24份血标本，给予直线加速器6MV-X线，源皮距（source skin distance, SSD）100cm，剂量建成1.5cm，分别照射0Gy、1Gy、2Gy、3Gy、5Gy，照射后2小时，利用淋巴细胞分离液提取出淋巴细胞，再利用谷胱甘肽试剂盒检测淋巴细胞中的总谷胱甘肽（total glutathione, T-GSH）、氧化性谷胱甘肽（oxidized glutathione, GSSG）以及GSH的含量，比较不同剂量照射后，淋巴细胞中GSH含量的差异，并建立剂量-效应曲线，观察GSH的含量与辐射剂量之间的相关性。此外，同一血标本在X线照射后，加入带有植物血凝素（phytohemagglutinin，PHA）的RPMI-1640培养基中进行培养，37℃培养44h，加入秋水仙素阻滞细胞的有丝分裂，继续培养至52h，收获中期分裂相细胞。经低渗、预固定、固定、离心、制片后读片，每张片子观察100个细胞，数出其中的双着丝粒数，计算出双着丝粒染色体畸变率。微核实验为同一血标本经X线照射后，加入带有PHA的RPMI培养基，37℃培养40h后，加入松胞素-B(Cytochalasin B)，继续培养至72h收获，经低渗、固定、制片、Giemsa染色后读片，每张片子观察500个双核细胞，数出其中的微核数，计算出每个剂量组的微核形成率。结果： GSH含量与辐射剂量之间呈直线负相关，剂量-效应曲线拟合公式为y=-0.59x+5.97，R2=0.95。GSH/GSSG比值与辐射剂量之间呈三次函数变化趋势，剂量-效应曲线拟合公式为y=-0.08x3+0.82x2-2.78x+4.69，R2=0.98。五个剂量组的染色体畸变率分别为0，10.08%，41.17%，73.08%，207.42%，与辐射剂量之间关系呈二次函数变化趋势，剂量-效应曲线拟合公式为y=7.78x2+2.28x+0.64，R2=0.9984。五个剂量组的微核形成率分别为1.7‰，43.5‰，84.4‰，197.2‰，478.8‰，与辐射剂量之间关系亦呈二次函数变化趋势，剂量-效应曲线公式为y=15.9x2+16.3x+0.55，R2=0.9981。且GSH含量与双着丝粒染色体畸变率之间存在相关性，r=0.966；GSH含量与微核率之间存在相关性，r=0.968。结论：GSH含量与辐射剂量之间呈直线负相关，且GSH含量与染色体畸变率和微核率之间存在较好的相关性，故利用GSH含量变化进行辐射生物剂量估算具有较高的可行性，与传统的CA分析法与CB微核法相比，通过GSH含量进行照射剂量估算更为省时、简便。