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研究目的:本研究通过分析葛根素对糖尿病大鼠血清及视网膜组织中AGE-修饰蛋白表达水平的影响,为临床上糖尿病视网膜病变的诊断和治疗探索新的分子生物学机制。研究方法:1.SPF级成年雄性SD大鼠150只,随机分为正常对照组1月、3月组(N1,N3)、DM 1月、3月组(D1,D3)、葛根素干预1月、3月组(P1,P3),每组25只。2.通过2%链脲佐菌素(STZ)予以大鼠腹腔注射,建立DM大鼠模型,55mg/kg。对照组给予同等剂量的柠檬酸缓冲液腹腔注射。注射后3天后,及1周后大鼠尾静脉分别取血,测定其空腹血糖,若两次均≥16.7mmol/L则视为DM造模成功。葛根素干预组大鼠予以葛根素(80mg/kg/d)灌胃。3.造模成功后,于相应时间点(灌胃开始1月、3月后)用10%水合氯醛麻醉大鼠,从心脏取血获得标本,低温下迅速分离视网膜组织,部分样品固定后在光镜及电镜下进行观察,其余标本-80℃低温保存。4.分离各组大鼠血清,自备视网膜匀浆,ELISA法分析各组大鼠视网膜及血清中AGE-修饰蛋白的总浓度。5.1-DE/Western分离各组大鼠视网膜及血清中AGE-修饰蛋白。Image Lab软件分析分组大鼠血清及视网膜中AGE-修饰蛋白表达水平,ANOVA比较各组大鼠视网膜及血清中AGE-修饰蛋白表达水平的差异,P<0.05视为有显著性差异。研究结果:1.糖尿病组大鼠(D1,D3)、葛根素干预组大鼠(P1,P3)体重均显著低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),D1组与D3组、P1组与P3组,及糖尿病组与葛根素干预组之间大鼠体重无统计学差异。2.糖尿病组大鼠(D1,D3)、葛根素干预组大鼠(P1,P3)血糖均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),相同时间点时,糖尿病组血糖升高较葛根素干预组血糖更高(D1vs P1:27.90±1.79 vs 25.39±2.45;D3vs P3:30.33±1.69vs 25.54±2.00,P<0.05)。D3组大鼠血糖水平显著高于其余各组(P<0.05),P1与P3组间血糖水平无统计学差异。3.视网膜病理形态学改变:正常组大鼠(N1、N3)与D1组、P1组间无明显差异。D3组病变最为严重,视网膜各层细胞数量减少、排列紊乱,细胞器结构破坏严重;毛细血管出现严重的扩张充血现象。P3组病变较D3组有所减轻。4.ELISA定量大鼠血清及视网膜中AGE-修饰蛋白浓度。糖尿病组大鼠(D1,D3)、葛根素干预组大鼠(P1,P3)血清中AGE-修饰蛋白浓度均显著高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。D3组大鼠血清中AGE-修饰蛋白浓度显著高于D1组大鼠(P<0.05)。D1组与P1组大鼠视网膜中AGE-修饰蛋白浓度无统计性差异(P>0.05),D3组大鼠视网膜组织中AGE-修饰蛋白浓度显著高于P3组大鼠(P<0.05)。5.1-DE/Western共分离出5种差异性表达的血清AGE-修饰蛋白。糖尿病组大鼠(D1、D3)、葛根素干预组大鼠(P1、P3)上述5种血清AGE-修饰蛋白表达量均显著高于正常对照组大鼠(N1、N3),差异均有统计学意义(均P<0.05)。其中2种AGE-修饰蛋白D1组的表达量显著高于P1组(P<0.05),3种AGE-修饰蛋白D3组的表达量均显著高于P3组(P<0.05)。6.1-DE/Western在视网膜组织中共分离出4种差异性表达的AGE-修饰蛋白,其中3种AGE-修饰蛋白在糖尿病组大鼠(D1,D3)、葛根素干预组大鼠(P1,P3)均显著高于正常对照组大鼠(N1,N3),差异有统计学意义(P<0.05)。4种AGE-修饰蛋白的表达量在D3组均显著高于P3组,差异有统计学意义(P<0.05),但D1组与P1组之间均无统计学差异(P>0.05)。研究结论:1.糖尿病大鼠血清及视网膜组织中AGE-修饰蛋白的表达水平显著上调,且随着糖尿病病程的延长,AGE-修饰蛋白的表达水平增加。2.葛根素干预可以降低糖尿病大鼠血糖水平,改善糖尿病大鼠视网膜组织的病理学损害。3.葛根素干预可降低糖尿病大鼠血清及视网膜组织中AGE-修饰蛋白的总浓度,下调血清及视网膜组织中一些AGE-修饰蛋白的表达水平,其作用的强度与作用时间密切相关。